卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV）,是人类肿瘤病毒之一。它是卡波氏肉瘤（Kaposi’s sarcoma）、原发型渗出性淋巴瘤（Primary Effusion Lymphoma,PEL）和多中心卡斯特曼病（Multicentric Cattleman’s Disease,MCD）的病原体,也有证据表明,KSHV还可能与其它慢性或肿瘤性疾病有关。KSHV每年在全世界范围内导致近34000名患者罹患肿瘤和15000名患者的死亡。尽管随着联合抗逆转录病毒疗法的发展,发病率有所降低,卡波氏肉瘤依旧是HIV病人中最常见的肿瘤之一,对人类健康构成重大威胁。研究KSHV的从头感染过程对理解病毒的生命周期及后续药物靶点的发掘至关重要。KSHV的从头感染是一个复杂的过程,许多宿主因子参与其中,SLC7A11可能就是这样一个分子。SLC7A11也称作x CT,是一个多次跨膜的蛋白,负责将谷氨酸排到胞外并输入胱氨酸。该分子起初从c DNA文库中被筛选出来,当作KSHV的融合受体。然而,后续一些研究有不同的结论:当KSHV感染某些种类的细胞时,x CT似乎并没有发挥作用;或者x CT仅影响病毒基因的表达,却并不影响病毒的吸附和侵入的。并且,至今尚未找到能与x CT发生相互作用的糖蛋白。因此,x CT在KSHV从头感染中的作用尚不明晰,而这也是本文研究的重点。我们利用CRISPR-Cas技术,在KSHV易感的HEK293T和SLK细胞系上,对x CT基因进行敲除,以检测该基因对病毒感染的影响。尽管通过T7E I内切酶验证和Sanger测序等实验证明,我们采用的CRISPR-Cas系统可以有效对细胞的x CT基因进行编辑;但由于x CT基因的敲除可能会诱发细胞的铁死亡,我们始终无法得到x CT敲除的单克隆细胞系。因此,我们转而采用si RNA介导的x CT敲低实验对该分子在KSHV从头感染中的作用进行研究。r KSHV.219毒株可组成型表达绿色荧光蛋白,用该毒株感染x CT敲低后的HEK293T细胞,结果表明GFP+细胞的数量与对照组相比并未减少,反而有所上升;并且病毒各基因的表达与对照组相比也有所上升。荧光图片的实验结果与病毒基因表达的结果相吻合。我们还在HEK293T细胞上进行了过表达实验。x CT过表达之后,用r KSHV.219毒株感染细胞,GFP+细胞的数量及病毒各基因的表达与对照组相比均未显著增加。功能缺失性和功能获得性实验的结果吻合,两者共同说明:在KSHV感染HEK293T细胞的过程中,x CT并不是KSHV所依赖的宿主因子。