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目的:探讨人慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)急变细胞系K562在BALB/c裸鼠体内建立白血病模型的方法以及K562细胞在BALB/c裸鼠体内的生物学行为,为CML各种治疗手段的研究提供实验用动物模型。
方法:
1.4~6周龄的BALB/c裸鼠在无菌条件下行脾切除术(Splenetomy),环磷酰胺腹腔注射(Cytoxan introperitoneal injection)及全身亚致死辐射(Sublethal irradiation)预处理(SCI预处理),辐射后的BALB/c 裸鼠经腹腔(9只)、尾静脉(3只)接种对数生长期的K562细胞1×107个/只。
2.体外培养人CML急变细胞系K562,取对数生长期的细胞接种BALB/c裸鼠。
3.BALB/c裸鼠接种K562细胞后,观察其生存状态,每隔10~14天尾静脉取血,血涂片观察白血病细胞,流式细胞仪检测CD13、CD45抗原,至BALB/c裸鼠将死亡时,取裸鼠骨髓,检测骨髓中CD13、CD45抗原表达情况,并取BALB/c裸鼠重要脏器肝、肾、肺及局部瘤块做病理切片,观察白血病细胞浸润脏器情况。
结果:
1.SCI预处理的BALB/c裸鼠经接种K562细胞后,随着时间的延长,裸鼠不同程度地出现萎靡少动、步态不稳、进食减少、消瘦、脊背拱起,逐渐衰竭死亡。生存时间为45.5±6.1天(34~55天)。经腹腔接种者,于3周后腹腔开始出现肿块,并逐渐增大,肿块质韧。
2.外周血涂片:早期未发现白血病细胞,第3周开始观察到K562白血病细胞,比例为2.3±0.9%(1%~4%),病程后期,白血病细胞比例增加,占7.8±2.4%(4%~11%)。
3.CD13、CD45抗原表达:第2周检测到外周血CD13表达率为6.13±1.65%,CD45表达率为2.84±0.26%;第4周CD13表达升高为22.55±5.24%,CD45表达为2.93±0.31%。裸鼠处死时,骨髓中CD13表达比例为6.19±0.82%,CD45表达比例为4.86±1.66%。
4.病理检查:裸鼠肝脏肿大,肝、肺、肾可见白血病细胞浸润,腹腔注射部位形成瘤块,未侵及其它器官,取瘤块做病理,可见大量白血病细胞。
结论:BALB/c裸鼠经SCI预处理后,经腹腔注射、静脉注射途径移植可成功建立起K562/BALB/c裸鼠白血病模型,模型发病时间长,而且局部形成的瘤块质韧成型,有效解决了K562细胞在裸小鼠局部形成的瘤块松软不成形的问题,并且建立该模型代价低廉,有利于进行药物试验和探索其它治疗CML的途径之用。