论文部分内容阅读
动物实验资料和人群流行病学调查资料证实氟不仅可以直接作用于睾丸和附睾,破坏其结构,造成生殖损伤,还可以通过干扰下丘脑-垂体-性腺轴和睾丸局部微环境,引起生殖毒性。支持细胞(sertoli cell, SC)是睾丸曲细精管中唯一的体细胞,对维持睾丸内部的生精微环境具有极其重要的作用。首先,支持细胞之间可以形成紧密连接,在一定程度上可以阻止外来化学物对生精细胞的影响。其次,支持细胞还能够分泌各种活性物质,其中研究最多的是雄激素结合蛋白(Androgen Binding Protein, ABP)抑制素B(Inhibin B,INH B)。ABP毙够转运和储存睾酮和二氢睾酮,调节血液和附睾液中雄激素的浓度。INH B能够抑制卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)分泌,不仅在维持下丘脑-垂体-性腺轴的平衡中起着重要作用,而且可直接促进生精细胞的分化和发育。由于位置和功能的特殊性,支持细胞成为许多外源化合物的靶细胞。目的：以体外培养的大鼠睾丸支持细胞为载体,使其暴露于不同浓度的氟化钠,采用RT-PCR技术和ELISA方法从基因和蛋白质两个水平分析氟化钠对支持细胞合成和分泌ABP和INH B的影响,期望为探讨氟化钠引起雄性内分泌紊乱的机制提供一些线索。方法：1 18～21日龄SD大鼠,采用胰蛋白酶和胶原酶两步法分离纯化支持细胞。分离的支持细胞在37℃、5%CO2条件下进行培养。确定染毒浓度为0、2.5μg/ml、5.0μg/ml、10. 0μg/ml和20.0μg/ml。2体外培养支持细胞按上述确定的浓度染毒24h后,采用RT-PCR技术,以GAPDH为内参,检测支持细胞内ABP和INH B mRNA的相对表达量。3采用ELISA法测定培养液中ABP和INH B的含量。4统计学分析。运用SPSS 12.0统计软件的单因素方差分析(analysis of variance, ANOVA)、Bonfferoni两两比较、Levene方差齐性检验对数据进行统计学分析(检验水准a=0.05)。结果：1分离培养的支持细胞存活率达到95%以上,生长良好,且纯度较高。2①ABP mRNA相对表达量在各浓度组与对照组相比,2.5μg/ml组高于对照,且差异有统计学意义(P<0.05)；5μg/ml组高于对照组,10μg/ml和20μg/ml组低于对照组,但是差异均无统计学意义(P>0.05)。②INH B mRNA相对表达量在各浓度组与对照组比较,2.5μg/ml和5μg/ml组均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)；其余两组低于对照组,但是差异均无统计学意义(P>0.05)。3①各染毒组培养基中的ABP含量均低于对照组,但差异没有统计学意义(P>0.05)。②与对照组相比,2.5μg/ml和5.0μg/ml组培养基中INH B含量高于对照组,但差异没有统计学意义(P>0.05);10μg/ml和20μg/ml组培养基中INHB含量低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论：本研究的染毒浓度范围内,在基因水平,较低浓度的氟(2.5μg/ml)可以影响ABP和INH B mRNA的表达；在蛋白质水平,氟对ABP和INH B没有明显影响。