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目的:本研究拟对鞘内注射布托啡诺和氯胺酮在福尔马林炎性痛大鼠的疼痛行为学改变进行观察,并应用免疫组织化学方法检测大鼠脊髓背角神经元一氧化氮合酶(nNOS)和蛋白激酶C(PKC)表达的变化。从而为鞘内布托啡诺联合氯胺酮应用于疼痛治疗提供理论依据,并进一步阐述鞘内布托啡诺联合氯胺酮产生镇痛的可能分子机制。
方法:40只SD大鼠随机分为7组,对照组、生理盐水组每组5只,其余每组6只:对照组(C组:鞘内预先不注射任何试剂),生理盐水组(NS组:鞘内预先注射生理盐水),低剂量布托啡诺组(LB组:鞘内预先注射布托啡诺12.5μg),高剂量布托啡诺组(HB组:鞘内预先注射布托啡诺25μg),低剂量氯胺酮组(LK组:鞘内预先注射氯胺酮50μg),高剂量氯胺酮组(HK组:鞘内预先注射氯胺酮100μg)和低剂量氯胺酮联合低剂量布托啡诺组(LK+LB组:鞘内预先注射氯胺酮50μg后立即注射布托啡诺12.5μg)。各组均根据改良Yaksh法进行鞘内置管。置管5d后,大鼠均于左侧后足掌部皮下注射5%福尔马林50μg;注射福尔马林前30min,各组大鼠都预先鞘内注射生理盐水,布托啡诺低剂量(12.5μg)、高剂量(25μg),氯胺酮低剂量(50μg)、高剂量(100μg)及低剂量氯胺酮联合低剂量布托啡诺(50μg+12.5μg),对照组鞘内不注射任何试剂。每组的药物注射容量为10μl,随后用10μg生理盐水冲管。与疼痛相关的行为学测定通过计算注射福尔马林1小时内大鼠注射足疼痛行为(注射足自发缩足、舔足和咬足)总计反应时间来确定。所有大鼠均在注射福尔马林24hr后处死,用免疫组化法观察大鼠L5节段脊髓背角nNOS和PKC的表达。
结果:(1)HB组和LK+LB组的福尔马林试验大鼠第1和第2时桂的注射足疼痛行为时间总计减少,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),其余组对福尔马林第1、2时相没有显著影响;(2)与C组比较,HB组和LK+LB组大鼠脊髓背角nNOS和PKC免疫反应阳性细胞数量明显减少,有显著差异(P<0.01)。
结论:(1)在大鼠福尔马林炎性痛模型中,鞘内预先注射布托啡诺25μg与鞘内预先注射布托啡诺12.5μg联合氯胺酮50μg可产生相似的镇痛效果。(2)在福尔马林炎性痛模型中,nNOS与PKC表达明显升高且呈正相关,表明nNOS和PKC在脊髓水平伤害性信息的传递和调制中可能发挥重要作用。(3)高剂量布托啡诺与低剂量氯胺酮联合低剂量布托啡诺组的nNOS和PKC表达明显降低且呈正相关,表明布托啡诺及布托啡诺联合氯胺酮的镇痛作用可能与抑制NMDAR-NO-PKC信号转导系统有关。