【摘 要】
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目的: 本文通过研究骨化三醇作用于VDR基因沉默前后的胰腺癌PANC-1细胞，检测细胞凋亡和周期阻滞情况以及与凋亡和周期调节相关基因地表达变化，评价VDR基因表达对骨化三醇抗
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目的: 本文通过研究骨化三醇作用于VDR基因沉默前后的胰腺癌PANC-1细胞，检测细胞凋亡和周期阻滞情况以及与凋亡和周期调节相关基因地表达变化，评价VDR基因表达对骨化三醇抗胰腺癌的影响，并进一步探讨相关作用机制。 方法: 予以不同浓度骨化三醇处理胰腺癌PANC-1细胞，采用MTT比色法分别于作用24h、48h、72h后检测细胞的增殖情况，并筛选出合适地用药时间与浓度;设计并合成三组VDR-siRNA，按说明书利用Lipofectamine2000转染PANC-1细胞，并从中筛选出沉默效率最佳者;Hoechst33258荧光染色法观察VDR基因沉默前后骨化三醇作用下细胞形态结构的改变;流式细胞仪检测细胞调亡和细胞周期阻滞情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)和逆转录荧光定量聚合酶链式反应法(Rt-PCR)检测凋亡、细胞周期相关基因(Caspase-3，Bcl-2，Bax，p21，p27)的表达变化。 结果: 骨化三醇对胰腺癌PANC-1细胞的增殖具有显著地抑制作用，且有时间、剂量依赖性。骨化三醇浓度在50nM时对PANC-1细胞地抑制效果最佳，细胞活性显著降低。经siRNA-VDR-1103转染的PANC-1细胞VDR基因表达降低近91％。Hoechst33258染色、流式细胞仪检测均显示骨化三醇50nM干预24h可明显诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡和G0/G1期阻滞，干预48h后结果更显著;VDR基因沉默后作用效果明显降低。Western Blot结果显示，骨化三醇干预胰腺癌PANC-1细胞后Bax/Bcl-2比值变化不明显，Caspase-3、p21和p27蛋白表达均明显上调;VDR基因沉默后，随着骨化三醇干预Bax/Bcl-2比值反而较对照组降低，Caspase-3、p21和p27表达量也明显降低，且随着骨化三醇作用变化不明显。Rt-PCR同样佐证了上述结果。 结论: 1.骨化三醇可以诱导胰腺癌PANC-1细胞株的凋亡，促使细胞周期阻滞于G0/G1期，进而抑制肿瘤细胞的增殖;VDR基因沉默后的胰腺癌PANC-1细胞株对骨化三醇的敏感性明显降低。 2.VDR基因可能在调节凋亡相关基因和细胞周期调控相关基因的表达中发挥重要作用。VDR基因沉默后，凋亡相关基因Caspase-3和细胞周期相关基因(p21和p27)的表达也明显受到抑制。 3.依赖VDR途径是骨化三醇抗胰腺癌的主要方式，但对Bax/Bcl-2的表达调控可能是通过其他非依赖VDR的作用途径实现的。
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