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目的：构建前列腺特异性膜抗原增强子／启动子(prostate-specific membrane antigen enhancer and promoter, pPSMAe/p)调控的靶向EGFP的shRNA真核表达重组质粒pPSMAe／p-siEGFP-polyA，探索前列腺特异性膜抗原增强子／启动子对前列腺癌细胞中shRNA表达的特异性驱动作用。方法：1．采用分子克隆技术将人工合成的含靶向EGFP的shRNA(EGFP-shRNA)及终止信号(polyA)序列的DNA片段定向插入含有PSMA增强子／启动子基因序列的质粒载体(pEGFPe／p)，构建PSMA启动子／增强子靶向性调控的EGFP-shRNA真核表达重组质粒pPSMAe／p-siEGFP-polyA。2．脂质体介导转染重组质粒pPSMAe／p-siEGFP-polyA及报告基因表达质粒pEGFP-C1进入前列腺癌细胞系(LNCaP、PC-3、DU145)和非前列腺癌细胞系(MCF-7)。通过荧光表达来观察PSMAe／p在细胞中靶向调控EGFP-shRNA表达的作用。利用RT-PCR技术检测细胞转染后重组质粒pPSMAe／p-siEGFP-polyA对不同转染细胞中EGFP mRNA表达的影响。利用Western免疫印迹技术检测重组质粒pPSMAe／p-siEGFP-polyA对转染细胞中EGFP表达的影响。结果：1．成功构建前列腺特异性膜抗原增强子／启动子(PSMAe／p)靶向性调控的EGFP shRNA真核表达重组质粒pPSMAe／p-siEGFP-polyA，通过测序鉴定，基因序列完全正确。2．转染重组质粒pPSMAe／p-siEGFP-polyA及报告基因表达质粒pEGFP-C1进入各种细胞系后，仅有表达PSMA的LNCaP细胞系实验组中绿色荧光阳性细胞比率比对照组明显降低(P＜0.001)，而不表达PSMA的PC-3、DU145和MCF-7等细胞系实验组绿色荧光阳性细胞比率与对照组无统计学差异(P＞0.05)。3．RT-PCR结果显示仅有LNCaP细胞系实验组EGFP mRNA水平比对照组明显降低(P＜0.001)，而PC-3、DU145和MCF-7等细胞系实验组EGFP mRNA水平与对照组无统计学差异(P＞0.05)。4．Western免疫印迹结果显示仅有LNCaP细胞系实验组目的蛋白EGFP含量比对照组明显减少(P＜0.001)，而PC-3、DU145和MCF-7等细胞系实验组目的蛋白EGFP含量与对照组无统计学差异(P＞0.05)。结论：成功构建了前列腺特异性膜抗原增强子／启动子靶向性调控的EGFP-shRNA真核表达重组质粒pPSMAe／p-siEGFP-polyA，并证实该重组质粒特异地干扰PSMA表达阳性前列腺癌细胞系中的EGFP基因的表达。初步证实了前列腺特异性膜抗原增强子／启动子对前列腺癌细胞中shRNA表达的特异性靶向驱动作用，为后续实验打下了基础。