【摘 要】
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目的:观察并讨论音猬因子(sonic hedgehog,Shh)信号转导通路在缺氧刺激诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19血管内皮生长因子(VEGF)表达中的作用。方法:将人视网膜色素上皮细
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目的:观察并讨论音猬因子(sonic hedgehog,Shh)信号转导通路在缺氧刺激诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19血管内皮生长因子(VEGF)表达中的作用。方法:将人视网膜色素上皮细胞ARPE-19分成正常对照组和缺氧组。缺氧组细胞中加入100μmol/L CoCl2溶液制作成为缺氧细胞模型。缺氧组再分为缺氧对照组(CoC12组)、环巴明(Cyclopamine)处理组(CYA组)以及二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组(DMSO组)。CYA组于缺氧前1h加入20μmol/L的Cyclopamine进行预处理;DMSO组加入1‰体积的DMSO进行预处理。各组细胞分别培养4、8、12、24小时。采用荧光定量PCR(RT-PCR)检测ARPE-19细胞内Shh、VEGF mRNA的表达;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测人视网膜色素上皮细胞ARPE-19培养上清液中VEGF的蛋白表达量。结果:RT-PCR测算结果显示,缺氧(COC12)刺激ARPE-19细胞4、8、12、24小时,ARPE-19细胞内的Shh、VEGF mRNA表达量随着时间延长逐渐增高,与正常对照组细胞内Shh、VEGF mRNA表达比较,差异具有统计学意义(Shh mRNA统计分析 F=45.260P=0.001;VEGFmRNA 统计分析 F=264.938P=0.001)。CYA组细胞内Shh、VEGF mRNA表达与CoC12组比较,差异均有统计学意义(4、8、12、24 小时 Shh mRNA 统计分析 P=0.018;P=0.001;P=0.001;P=0.001 VEGF mRNA统计分析 P=0.001;P=0.001 P=0.001;P=0.001);DMSO 组细胞内 Shh、VEGF mRNA表达与CoCl2组比较,差异均无统计学意义(4、8、12、24小时Shh mRNA统计分析 P=0.788;P=0.649;P=0.779;P=0.831 VEGFmRNA 统计分析 P=0.371;P=0.322 P=0.735;P=0.729)。ELISA 测算结果显示,缺氧 CoCl2 组 ARPE-19 细胞培养上清液中的VEGF蛋白表达量与正常对照组比较,差异变化均有统计学意义(F=3156.676 P=0.001)。CYA组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量较CoC12组表达明显降低,差异均有统计学意义(4、8、12、24h VEGF蛋白统计分析P均<0.01)。结论:音猬因子信号通路可能参与到了缺氧导致的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19中VEGF的表达。
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