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1 目的 慢肝消是导师田德禄教授发掘中医理论，积多年临床经验总结出的治疗酒精性肝纤维化的有效方剂。为探讨其治疗酒精性肝纤维化(alcoholic liver fibrosis, ALF)的作用机制，通过实验研究，观察该方对ALF模型大鼠胶原降解的影响。 2 方法 2．1 酒精性肝纤维化大鼠模型的建立 (1) 动物分组 体重140～160g雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型4wk、模型9wk、模型14wk共5组，每组8只大鼠。 (2) 造模方法 采用灌胃乙醇—吡唑—玉米油混合液日1次；和腹腔注射乙醛—血红蛋白加合物10天1次的方法，分别持续4wk、9wk、14wk，复制酒精性肝纤维化大鼠模型。 (3) 检测方法 采用生化方法检查大鼠肝功；采用放射免疫法检测大鼠血清Ⅲ型前胶原(Procollagen，PCⅢ)、透明质酸(hyaluronic acid，HA)水平；采用HE染色法和Mallory染色法，在光镜下观察大鼠一般病理形态改变和胶原纤维增生情况。 2．2 慢肝消对酒精性肝纤维化大鼠病理形态学的影响 (1) 动物分组 体重140～160g雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组、治疗对照组共4组，每组8只大鼠。 (2) 造模方法 按照实验2.1的方法，复制酒精性肝纤维化大鼠模型。 (3) 给药方法 从实验第15周开始，正常组、模型组每天灌胃生理盐水1ml／100g体重，日1次；治疗组、治疗对照组每天分别灌胃慢肝消1ml／100g体重、肝脾康1ml／100g体重，日1次；共4周。 (4) 检测方法 采用生化方法检查大鼠肝功；采用放射免疫法检测大鼠血清 PCⅢ、HA水平；采用HE染色法和Mallory染色法，按照病理学观察积分标准，观察慢肝消对模型大鼠脂肪变性程度和胶原纤维增生程度的影响。 2．3 慢肝消对酒精性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原影响 (1) 标本来源 肝组织标本来源于实验2.2中各组动物的肝脏。 (2) 检测方法 采用苦味酸—天狼猩红染色法，在偏振光显微镜下，观察慢肝消对Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响，并结合图像分析仪，进行半定量分析。 2．4 酒精性肝纤维化大鼠肝组织中MMP-13mRNA、TIMP-1mRNA表达的动态变化 (1) 动物分组 体重140～160g雄性Wistar大鼠，随机分为正常组、模型组两组。每组分别设0wk、4wk、9wk、14wk、18wk5个观察点，每个观察点8只大鼠。 (2) 造模方法 参照实验2.1的方法，复制酒精性肝纤维化大鼠模型。 (3) 检测方法 采用RT-PCR方法，检测各组大鼠MMP-13mRNA、TIMP-1mRNA表达的动态变化，并结合凝胶图像分析仪，进行半定量分析。 2．5 慢肝消对酒精性肝纤维化大鼠MMP-13mRNA、TIMP-1mRNA表达的影响 (1) 标本来源 来源于实验2.2中各组大鼠的肝脏。 (2) 检测方法 采用RT-PCR方法，检测各组大鼠MMP-13mRNA、TIMP-1mRNA的表达，并结合凝胶图像分析仪，进行半定量分析。 3 结果 3．1 酒精性肝纤维化大鼠模型的建立 (1) 血清学变化 模型组大鼠血清ALT、AST、GGTP、HA、PCⅢ明显升高，Alb明显降低，与正常组相比有显著差异(P<0.001)慢肝消调控酒精性肝纤维化大鼠胶原降解的机制研究 (2)病理形态学变化模型组大鼠4wk时出现弥漫性脂肪变性;gwk时，中央静脉及汇管区出现肝细胞坏死，伴局部中性粒细胞、淋巴细胞浸润。Mallory染色肝细胞周围、中央静脉周围、汇管区出现轻度胶原纤维增生;14wk时肝小叶结构异常，肝索排列紊乱;Ma 11。ry染色肝细胞周围、中央静脉周围、汇管区出现大量的胶原纤维增生，增生的胶原纤维穿插于肝小叶间，形成大小不等的假小叶. 3.2慢肝消对酒精性肝纤维化大鼠病理形态学的影响 (1)血清学变化治疗组、治疗对照组大鼠血清ALT、AST、GGTP、HA明显降低，与模型组相比差异显著(P<0.001)。治疗组、治疗对照组除“TP外，余皆无明显差异(P>0 .5). (2)病理形态学变化模型组大鼠肝小叶结构异常，肝索排列紊乱，肝细胞呈空泡变性，中央静脉、汇管区周围胶原纤维增生，形成大小不等的假小叶.治疗组、治疗对照组肝小叶结构渐恢复，肝细胞空泡变性明显减轻(P<0.05)，中央静脉及汇管区胶原纤维增生明显减少(P<0.05)。治疗组、治疗对照组之间无明显差异(P>0.05)o 3.3慢肝消对酒精性肝纤维化大鼠工、IH型胶原的影响 偏振光显微镜下，工型胶原呈红色或黄红色，IH型胶原呈绿色。模型组大鼠I、IH型胶原含量最高，治疗组、治疗对照组明显降低(P<0.01，P<0.05)，治疗组、治疗对照组之间无明显差异(P>0.05)。 3.4酒精性肝纤维化大鼠肝组织中 MMP一1 3mRNA、TIMP一lmRNA表达的动态变化 正常组大鼠MMP一13mRNA、TIMP一lmRNA在owk、4wk、gwk、14wk、18wk时，表达无明显变化(P>0.05)。模型组大鼠枷P一1 3mRNA表达在gwk、18wk相对4wk、14wk增高，14wk最低，但统计学处理无显著差异性(P>0.05); TIMP一lmRNA表达在4wk、gwk、14wk，随时间递增逐步增高(P<0.02)，至18wk时，表达明显减少(P<0.001)。模型组大鼠MMP一13mRNA表达，与正常组相比，无明显差异(P>0.05);TIMP一lmRNA表达明显增强(P<0.01)o 3.5慢肝消对酒精性肝纤维化大鼠肝组织中MMP一1 3mRNA、TIMP一lmRNA表达的影响 模型组大鼠