【摘 要】
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大多数天然过氧化物酶(POD)的催化活性中心是含铁元素的卟啉类分子,故目前报道的POD模拟酶的设计和开发也多以铁卟啉类分子作为催化位点。我们前期研究发现,二茂铁(Fc)基团具有电子供体-受体的共轭结构,且具备良好的氧化还原可逆性,可替代铁卟啉作为构建POD模拟酶的催化活性中心。基于此,本文提出通过共价修饰Fc基团的方法构建肽组装POD模拟酶及MOFs材料POD模拟酶的新思路。主要结论如下:(1)以
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大多数天然过氧化物酶(POD)的催化活性中心是含铁元素的卟啉类分子,故目前报道的POD模拟酶的设计和开发也多以铁卟啉类分子作为催化位点。我们前期研究发现,二茂铁(Fc)基团具有电子供体-受体的共轭结构,且具备良好的氧化还原可逆性,可替代铁卟啉作为构建POD模拟酶的催化活性中心。基于此,本文提出通过共价修饰Fc基团的方法构建肽组装POD模拟酶及MOFs材料POD模拟酶的新思路。主要结论如下:(1)以Fc基团共价连接的短肽Fc-FFX为单体,通过自组装得到了具有POD催化功能的肽组装模拟酶。催化机理研究表明,Fc基团在反应过程中经历了Fe的高价中间体状态,且反应动力学符合Ping-Pong多底物酶促机理。改变X氨基酸种类(X=F、D、H或R)不仅影响组装体形貌(纳米纤维或纳米球),而且影响其催化活性。构-效关系研究发现,Fc-FFF和Fc-FFD纳米纤维呈现β-sheet的二级结构,这一结构降低了Fc基团的静电电位,不利于催化;而Fc-FFH和Fc-FFR纳米球由于形成了turn型二级结构,其分子内邻近效应提高了Fc基团的静电电位,有利于底物的亲核进攻,从而表现出高催化活性。同时,纳米球组装体分子间的?-?堆积作用也更有利于高活性构象的形成和稳定。(2)通过在Ui O-66-NH2材料上共价修饰Fc基团制备得到了一种具有POD催化活性的模拟酶Ui O-66-NH-OC-Fc。研究发现,Ui O-66-NH-OC-Fc具有与Ui O-66-NH2类似的形貌、粒径分布和晶体结构。与Fc-COOH相比,Ui O-66-NH-OC-Fc催化活性大大提高,且具有较高的重复利用性。酶学性质研究证明该模拟酶具有如天然酶的最适催化p H和最适催化温度,反应动力学结果同样证明了Ui O-66-NH-OC-Fc具有如天然酶的催化动力学特征。此外,基于这两类新型POD模拟酶的催化功能,本文还建立起了针对疾病相关分子(葡萄糖、尿酸、肌氨酸)及H2O2的比色定量检测方法。结果证明,利用Fc共价修饰的POD模拟酶表现出对目标物更宽的线性检测范围和更低的检测限,有望应用于实际生物医学领域。
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