论文部分内容阅读
肝癌(HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,致死率高,严重危害人类健康。目前认为病毒、宿主和环境因素之间复杂的相互作用最终导致了HCC的发生。HBV感染引起HCC的主要病因,但其具体的发病机制并不明确。研究表明乙肝表面抗原大蛋白在慢性乙型肝炎恶性转化过程中起重要作用[1-6]。主要组织相容性复合物Ⅰ类相关分子MICB是NKG2D的配体,在肿瘤细胞免疫逃逸过程中起重要作用。我们筛选出受HBsAg调节的miRNAs,在过表达HBsAg的HepG2细胞中有133个miRNAs是上调的,9个miRNAs是下调的。在这些受HBsAg调节的miRNAs中,有一部分miRNAs可以通过靶向MICB的3-UTR从而抑制MICB的表达。 目的:构建稳定表达HBsAg的细胞系,验证受HBsAg调节的miRNAs,并深入研究其在肝癌细胞免疫逃逸中作用机制。 方法: (1)HBsAg过表达载体转染HepG2、Huh7细胞,构建稳定细胞系,通过ELISA及western鉴定 (2)实时荧光定量PCR检测稳定表达HBsAg的肝癌细胞系miRNAs及MICBmRNA表达水平 (3)双荧光素酶报告基因实验验证HBsAg及miRNAs对MICB3-UTR的作用 (4)流式细胞术检测细胞表面MICB的蛋白表达水平 (5)NK细胞杀伤实验检测细胞的逃逸免疫清除能力 结果: (1)成功构建了稳定表达HBsAg的肝癌细胞系 (2)测序分析筛选出的miRNAs中,可能会调节MICB基因表达的miRNAs在HBsAg过表达HepG2和Huh7肝癌细胞系中上调 (3)HBsAg诱导的miRNAs下调肝癌细胞中MICB的表达 (4)与对照相比,miRNAs抑制剂部分恢复HBsAg过表达细胞系中MICB的表达 (5)在肝癌细胞HepG2.2.15中,HBV通过诱导miRNAs的表达下调细胞中MICB水平。 结论: (1)HBsAg能够调节肝癌细胞中部分miRNAs的表达 (2)HBsAg诱导的miRNAs能够下调细胞表面MICB水平 (3)HBsAg能够通过miRNAs间接抑制机体的抗肿瘤免疫应答。 (4)HBV能够通过miRNAs间接抑制机体的抗肿瘤免疫应答。