重组人Hepassocin的研制及抗肝损伤作用和分子机制研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wsj1234567
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Hepassocin(HPS)是特异性在肝再生过程中表达的基因,其cDNA为936bp的片段编码312个氨基酸残基的多肽。Hepassocin单体34kDa,体内以同源二聚体的形式发挥促肝细胞增殖的活性。成功克隆并构建了HPS的原核表达载体pBV220-HPS,以便利用基因工程技术获得重组HPS,并对其生物功能进行深入研究。 利用BL2l菌株作为工程菌株,成功实现了HPS的高效表达。HPS在BL2l中以包涵体的形式存在,约占菌体可溶性蛋白的40%以上。经过对包涵体洗涤、蛋白复性条件的优化,获得了较好的复性率和HPS含量大于80%的粗制蛋白,经过纯化后ItPS的纯度大于95%。 以获得的HPS蛋白为研究对象,采用【3H】-TdR掺入方法建立其活性评价的实验模型用于工艺评价,并对HPS的活性作用机制进行探讨。结果表明,HPS能强烈刺激正常肝细胞系L02的增殖,但是不能促进包括肝癌细胞系在内的其他组织细胞增殖;表明HPS的活性具有较强的肝脏特异性。相关实验提示,在L02细胞中,HPS是通过活化MAPK/ERK信号通路实现其促增殖活性的。在肝癌细胞系ltepG2和772l中,虽然HPS也可以活化其ERK通路,但是并不能促进它们的增殖,可能的原因是在肝癌细胞中HPS活化p—ERK水平过高,或p-ERK水平持续时间过长导致其下游效应分子的改变。 采用CCl4、D—gal两种不同的肝损伤模型观察了HPS在体内抗肝损伤作用。结果表明,HPS能够有效地提高这两种肝毒剂致大鼠肝衰竭的存活率,同时可以显著的降低肝损伤大鼠血清转氨酶ALT、AST的水平。组织学观察表明,HPS能够减轻CCl.、D-gal导致的大鼠肝损伤程度,保护肝脏;PCNA实验结果表明,HPS能够促进损伤后肝细胞的增殖,加快肝组织修复和肝再生过程。HPS对急性肝损伤具有较好的治疗效果,可能成为一种治疗严重肝病的有效药物。
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