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目的：体外培养刺激AFP特异性T细胞,检测其杀伤功能,为研究AFP158-166特异性T细胞免疫治疗奠定基础。方法：采用带FITC荧光标记的HLA-A2抗体,流式细胞技术筛选HLA-A2阳性健康志愿者,通过HLA-A2基因分型高分辨检测试剂盒(PCR-SSP),选择其中基因型为HLA-A0201者,取其外周血,密度梯度离心法分离获取外周血单核细胞(PBMC),通过加入人GM-CSF、IL-4及TNF-α等细胞因子贴壁粘附培养法培养收获树突状细胞(DC),将DC负载HLA-A0201表位态AFP158-166后,按1：10比例将其与新鲜淋巴细胞混合培养,并加入人细胞因子IL-2刺激,出现细胞大量增殖后收获细胞,行细胞毒性试验,用MTT法分别检测其杀伤肝癌细胞、负载AFP的T2细胞,以及未负载AFP的T2的能力。结果：从13例健康志愿者中筛选出基因型HLA-A0201阳性者4例,每50ml外周血培养的细胞中可收获DC细胞2×106个,培养至第7天检测表面抗原：CD83、CD80和CD86阳性率分别为(81.3±2.4)%、(92.8±1.4)%和(70.5±1.9)%。将DC负载AFP与淋巴细胞混合培养14d左右出现大量细胞增殖,行细胞毒性试验结果示,其对肝癌细胞、负载AFP的T2细胞有明显杀伤作用,而对未负载AFP的T2细胞杀伤作用不明显。结论：通过加入GM-CSF、IL-4及TNF-α等细胞因子体外贴壁粘附培养人PBMC可收获树突状细胞,将树突状细胞负载AFP158-166后与淋巴细胞混合,加细胞因子IL-2可刺激AFP158-166特异性T细胞增殖,并且可杀伤AFP+肝癌细胞以及负载AFP的T2细胞,为研究肝癌的过继细胞免疫治疗提供了实验基础。