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目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染导致的肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的表达水平及各区间位点的变异,探讨HBV ccc DNA不同区域核苷酸位点突变与HCC疾病的关系。基于基因表达谱数据筛选HBV感染的HCC疾病关键基因因子,为基因靶向性预防和治疗肝癌提供参考因子。方法:收集49例重庆医科大学附属第一和第二医院HBV感染形成的HCC患者的血清及肝脏癌组织和配对的癌旁组织,首先检测患者临床病毒学指标,再用特异性荧光定量Tag Man探针方法检测肝组织内HBV ccc DNA和DNA在HCC癌组织及癌旁组织中的表达水平;然后利用滚环扩增(Roling circle amplification,RCA)技术特异性扩增癌组织及癌旁组织中肝脏内的cccDNA。进一步分析患者癌组织和癌旁组织HBV cccDNA和DNA表达水平的差异及ccc DNA在X区和前C/C区核苷酸突变位点及突变组合与HCC发生的关系;下载Gene Expression Ominibus(GEO)数据库中5对HBV感染的HCC配对样本基因表达谱数据,通过生物信息学分析方法筛选与HCC直接关联的关键候选因子。结果:(1)在49对hcc病人中,共有35例配对的癌组织和癌旁组织的cccdna有效检测,cccdna在癌组织中总体表达水平显著低于对应的癌组织(5.20vs.9.35copiesy/cell,p=0.0033);配对的癌组织和癌旁组织的cccdna经过rca扩增后,在x和prec/c区分别有18对和16对能有效扩增,cccdnax区域位点突变率在癌组织中显著高于癌旁组织(28.63%和20.94%,p=0.0313);序列比对后发现x区t1721g位点和prec/c区域a1979g的突变在hcc癌组织中发生的个数显著地高于癌旁组织(p=0.04075,or=10.1598;p=0.0155,or=13.7529);由t1727g突变形成的组合突变a1703g/t1727g、a1762t/g1764a/t1727g、a1703g/t1727g/a1762t/g1764a,a1979g突变形成的组合突变a1979g/a2189、a1979g/a2189c/t/c2288a、a1979g/a2189c/t/c2288a/a2075t在癌组织中发生的次数高于癌旁组织。(2)筛选得到的高风险肝癌模块中(75%)过量表达基因egr1,fos,dusp1,且共同参与mapk信号通路和下游通路细胞周期调控。结论:既往文献报道的hcc中的典型突变位点a1762t/g1764a、g1896a/g1899a等在本研究的样本中cccdna的x区间和prec/c区间在癌组织和癌旁组织中均有突变,且无明显差别;发现的t1721g和a1979g单核苷酸突变及组合位点突变更具有特征性,它们的突变可能与hbv感染的hcc疾病的发展关联密切。筛选得到的egr1,fos,dusp1基因很可能成为早期识别hcc的生物标志,同时也为基因靶向性治疗HCC提供了候选因子。