论文部分内容阅读
目的：宫颈癌是全球女性最主要的癌症之一。分子流行病学证据明确显示人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)是宫颈癌及其癌前病变发生的必要因素。本研究对山西省定襄县女性宫颈HPV感染情况进行了调查,了解我国山西农村地区HPV的型别分布。同时制备HPV61、83和84型包含MY片段的标准品,作为筛查乳头瘤病毒科α属第3种中HPV61、83和84型的阳性对照。资料和方法：2008年11月至2009年2月,采取普查的方法在山西省忻州市定襄县选取两个行政村15-76岁的智力健全并知情同意的女性进行HPV感染和宫颈癌的调查。应用以MY09/11和GP5+/6+为引物的PCR方法检查817例标本中HPV的感染情况,然后通过序列分析和点杂交方法明确HPV的型别。同时我们也对该调查中发现的乳头瘤病毒科α属第3种中的HPV61、83和84型分离株,使用HPV通用引物MY09/11对上述分离株进行PCR扩增,并将扩增产物连接至pMD18-T载体,所得质粒进行序列分析,应用BioEdit生物学软件进行了核苷酸水平和氨基酸水平的分析。结果：山西省定襄县15-76岁女性宫颈HPV的总感染率为15.1%,单一HPV型别感染的占87.0%,两种及以上型别感染的占13.0%。35-44岁年龄段是该地区HPV感染的高峰年龄,HPV16、58、33和18型是该地区人群中的最常见的4种型别,同时在细胞学正常、LSIL、HSIL以及宫颈癌的人群中HPV的感染率逐渐增高。另外,HPV61和83型分离株分别与参考株序列U31793和AF151983比对,在核苷酸水平完全一致；HPV84型分离株与参考株序列AF293960比对,在核苷酸水平发生4个点突变,分别为C6760T、T6931C、T6951C和C6987A,其中C6987A导致D441E氨基酸残基的突变。我们分别将包含上述三个分离株MY片段的质粒与HPV阴性的宫颈癌细胞系C33A全核酸混合制备标准品并以此作为模板,对MY09/11的扩增进行了评估,发现：HPV61型标准品检测的灵敏度高于HPV83和84型。结论：在山西宫颈癌的高发区人群中,HPV16是最重要的型别,位于其后的分别是HPV58、33和18型。这些数据为我国山西高发区的HPV疫苗研发工作提供了理论依据。我们制备了HPV61、83和84型包含MY片段的标准品,作为筛查乳头瘤病毒科α属第3种的HPV61、83和84型的阳性对照。