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研究背景：肺癌是世界范围内癌症致死的首位病因。以表皮生长因子受体为靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs),在含特定EGFR基因突变肺癌患者中取得了显著的用药反应性以及较好的临床疗效。EGFR基因突变中,以19号外显子上缺失突变delE29,及21号外显子上点突变L858R,突变率最高,对TKIs药物反应最好。相反的,T790M点突变是最常见的TKIs耐药突变。除上述突变外,EGFR基因其他位点突变,如G719X(X代表A/S/C)、L861Q、S768I等,临床上突变率较低,且常常倾向于以联合突变的形式存在。充分认识这些突变基因与非小细胞肺癌发生的关系,以及含有这些突变基因的患者对TKIs药物的反应性,可以让我们更充分的认识肺癌发病机理,并指导临床实践。研究方法与对象：本文克隆并构建含EGFR野生型及L858R、G719A、G719S、 G719A+L861Q联合突变基因的载体,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,从昆虫细胞sf9中表达并纯化出野生型及突变蛋白。尝试通过表面等离子共振(SPR)技术研究蛋白与TKIs亲和力,通过商品化试剂盒探索突变蛋白的激酶活性以及TKIs对激酶活性的抑制作用。同时,回顾全国5125例在2009年至2012年接受EGFR基因检测的患者,和北京协和医院489例2010年至2014年接受EGFR基因检测的患者,收集其中含G719X基因突变的患者包括性别、年龄、吸烟史、病理类型、治疗措施、肿瘤分期、无进展生存期和总生存期在内的临床资料,分析G719X突变患者的临床特征及对治疗的反应性。研究结果：通过研究我们成功分离并纯化了野生型及含L858R、G719A、G719S、 G719A+L861Q突变的EGFR酪氨酸结构域蛋白；通过蛋白激酶实验测得10μM/ml的各种蛋白其磷酸化底物多肽分子比例分别为：G719A+L861Q 70.3%; L858R 42.69%; G719A 26.67%; G719S 22.15%, Wt 12.34%。全国5125例患者中,G719X突变49例,突变率1.0%,其中G719A占63.3%,G719S占24.5%,G719C占12.2%,联合突变共16例,占32.7%。而协和医院489例患者中,G719X突变共13例,突变率为2.6%,其中G719A占46.2%,G719S占23.1%,G719C占30.8%,联合突变共6例,占46.2%。在接受随访的患者中,ⅢA-Ⅳ期的患者(5名)使用TKIs类药物获得5-22个月的无进展生存期,总生存期均在10个月以上。研究结论：联合突变G719A+L861Q突变蛋白激酶活性大于G719A, G719A大于G719S,相对应的临床数据中,G719A突变非小细胞肺癌患者多于G719S和G719C。正是由于联合突变可以增加EGFR蛋白的激酶活性,因而G719X突变常常和其他非常见突变联合出现在非小细胞肺癌患者中。含有G719X单突变或联合突变非小细胞肺癌患者使用TKIs可获得5-22个月的无进展生存期,及10个月以上总生存期,具体疗效及和标准含铂二联化疗效果对比尚需大规模临床研究证实。