研究背景和目的乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝非致细胞病变的DNA病毒,其持续感染可导致慢性肝炎,可进一步发展为肝硬化和肝癌。虽然对于HBV感染慢性化的潜在机制研究已有很多,但导致HBV持续性感染的患者体内抗病毒免疫应答的确切机制仍未完全阐明。本研究通过分析慢性乙型肝炎患者的外周血中髓源性抑制性细胞(MDSCs)的频率与健康人之间的差异、分析HBV成分与MDSCs频率的相关性,通过rHBsAg对MDSCs体外诱导作用及其可能机制的研究,旨在探讨MDSCs与HBV持续性感染的关系,为阐明MDSCs诱导HBV感染的免疫耐受机制提供实验依据,为HBV感染的免疫治疗提供新思路。方法(1)收集2013年6月至2013年9月期间在山西医科大学第一临床医院感染科住院治疗的慢性乙型肝炎患者肝素抗凝血标本,收集同期健康体检者血标本作为正常对照组。采用流式细胞术检测MDSCs频率,采用时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA)检测乙型肝炎血清标志物,采用实时荧光定量PCR技术检测HBV DNA含量,并进行相应统计学分析。(2)收集健康献血者的白细胞滤板,采用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC进行细胞培养,然后用rHBsAg和PHA分别对其进行诱导刺激。诱导培养四天后采用多色FCM检测培养细胞中MDSCs比例,采用ELISA法检测细胞培养上清液中IFN-y含量,采用荧光定量PCR技术检测细胞中Arg-1、iNOS和p47phox的mRNA的转录水平。结果(1)慢性乙型肝炎组与健康对照组外周血中均含有一定比例的MDSCs,慢性乙型肝炎组MDSCs频率[2.10(1.23,3.30)%]显著高于正常对照组[0.54(0.43,0.76)%](P<0.01)；HBsAg高含量组的MDSCs频率[3.30(2.40,5.30)%]显著高于低含量组[1.20(0.90,1.60)%](P<0.001),且不同HBeAg含量间MDSCs频率的差异无统计学意义(P=0.097); MDSCs频率与WBC总数之间无相关性(P=0.170)。(2) PBMC经体外培养后,rHBsAg刺激组MDSCs比例(8.93±1.23)%显著高于对照组(5.27±1.07)%(P=0.013); rHBsAg组上清液IFN-y含量[(34.30±7.98)]ng/ml与对照组[(33.05±7.60)ng/ml]之间的之间的差异无统计学差异(P=0.979),rHBsAg组Arg-1和p47phox的表达分别比对照组高1.81倍和5.26倍(P<0.001),差别具有显著性意义,而iNOS的表达量组间比较差异无统计学意义(P=0.197)。结论(1)CHB患者外周血MDSCs频率较健康对照组显著增高,提示CHB患者对HBV特异应答低下与MDSCs的过度募集有关,而MDSCs介导的机体免疫耐受机制与乙型肝炎的迁延不愈有关。(2) HBsAg含量高的患者MDSCs频率显著高于HBsAg含量低的患者,提示CHB患者外周血HBsAg可能在诱导MDSCs募集、生成过程中发挥重要作用。(3) rHBsAg诱导MDSCs抑制机体清除病毒的免疫功能,可能是通过精氨酸酶途径以及ROS途径发挥作用。