乙烷基亚硝基脲（N-ethyl-N-nitrosourea,ENU）是一种高效基因诱变剂,通过ENU诱导小鼠突变技术,可获得大量与人类及部分其他动物疾病相似的小鼠模型,用于致病基因的鉴定并且有助于认识相关疾病的发生、发展规律、研究预防措施及制定治疗方案（包括药物筛选）。本实验利用ENU诱导小鼠突变,获得一例显性遗传的角膜病小鼠模型,并对该小鼠进行致病基因的定位以及角膜组织病理学分析,具体工作如下:1、ENU诱变获得一例角膜病小鼠模型ENU腹腔注射16只野生型C57BL/6J（B6）雄鼠（G0）,待其恢复生殖能力后分别与野生型B6雌鼠配种,在167只后代（G1代）小鼠中筛选获得12只异常表型小鼠（显性突变筛选）,遗传试验结果发现其中2只突变表型（角膜混浊和无眼畸形）在B6背景中可以稳定遗传,但与C3H/HeJ（C3）小鼠配种后发现,无眼畸形小鼠在（B6×C3）F1背景中无一例异常表型,故最终确定选择出现角膜混浊表型的角膜病小鼠为研究对象,进行后续实验。2、角膜病小鼠致病基因的染色体定位将B6背景的角膜病杂合子小鼠与野生型C3小鼠配种获得F1代小鼠,F1代角膜病小鼠回交野生型B6小鼠以及C3小鼠,分别获得[（B6×C3）F1 ×B6]N2代和[（B6×C3）F1×C3]N2代杂合子小鼠。利用微卫星标记及连锁分析法对致病基因进行染色体定位,结果发现在15个N2角膜病小鼠样品中致病基因与微卫星D10Mit233（距着丝粒61.58cM）未发生一例交换,其LODs为4.5,确定致病基因与微卫星D10Mit233连锁,故将该致病基因定位于小鼠第10号染色体上。通过扩大N2数量及选取高密度微卫星对其进一步定位,目前将致病基因定位于小鼠第10号染色体D10Mit162（距着丝粒55.73cM）与D10Mit233（距着丝粒 61.58cM）之间。3、角膜病小鼠角膜病变的研究筛选3周龄、6周龄和20周龄的角膜病小鼠,将同日龄野生型小鼠作为对照组,进行眼球组织学分析。HE染色发现:野生型小鼠角膜整体结构层次分明,上皮细胞排列整齐,角膜基质层中胶原纤维平行排列,并且不含血管,内皮细胞层完整;角膜病小鼠角膜基质层出现大量角膜细胞并出现新生血管,角膜与虹膜发生粘连,角膜上皮局部变薄。采用免疫组织化学技术检测角膜上皮K12、K14、K10及PAX6的表达,结果发现:3周龄、6周龄和20周龄野生型小鼠角膜上皮K12表达于整个角膜上皮层,K14主要表达于角膜上皮细胞的基底层且信号较弱,K10不表达;角膜病小鼠角膜上皮在3周龄、6周龄及20周龄时K12信号明显减弱且局部为阴性,K14表达于整个角膜上皮层且局部为强阳性,K10局部表达为阳性,PAX6阳性细胞明显减少且信号变弱。结论:通过ENU诱变技术,本文获得一例可稳定遗传的角膜病小鼠模型,并将其致病基因定位在小鼠第10号染色体D10Mit162与D10Mit233之间,为后续致病基因的精确定位及鉴定工作奠定了基础。通过HE及免疫组织化学染色方法对其角膜组织进行研究,分析了角膜混浊表型出现的原因,本研究为该小鼠作为人类及部分其他动物角膜病动物模型的应用奠定了基础。