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目的 由于卵巢癌早期难于发现,术后化疗是其重要的辅助治疗方法。然而,由于化疗药物的非选择性组织杀伤引起的骨髓抑制而导致的末梢血白细胞减少,已经成为限制化疗剂量和按期进行规范性化疗的重要障碍,研究已证实卵巢癌的常规化疗方案中的顺铂及环磷酰胺能在多种肿瘤组织中诱导凋亡。因此,本研究以卵巢癌患者化疗病人为研究对象,通过研究患者化疗前后外周血白细胞的减少与细胞凋亡的相关性,探讨细胞凋亡检测对于早期预测白细胞减少的可能性。 对象与方法 对象: 研究对象为25位因卵巢癌接受手术治疗、术后进行化疗的患者。患者在化疗前接受系统性全身检查,除外影响白细胞数量的病理性疾患,确认白细胞总数、分数均在正常范围后开始化疗。化疗方案为CP方案。化疗前或化疗过程中由于白细胞的急剧减少而服用升白细胞药物的患者已从本研究中剔除。 方法: 1.外周血白细胞总数、分数计数: 患者空腹状态采血,肝素化外周血白细胞总数及分数由血液检测实验室机器计数后,与人工计数相符合者为入选标准。 2.外周血白细胞的分离与纯化: 患者于化疗前24小时内及化疗第5天立即采取静脉血2ml,采用肝素(100u/ml)抗凝,37℃孵育2小时后采用低张溶血素溶解破坏红细胞口PBS汀H 7.4)洗涤 2次,所得成分中含有 97%以上白细胞,其中95%为中性粒细胞。采用台盼蓝排除试验确定细胞活性大于 98%。 3.细胞凋亡的检测: ①流式细胞仪河CM)定量分析凋亡核k 亚H倍体人 凋亡细胞核的百分比采用DNA荧光直方图上亚二倍体峰值计数。 ②琼脂糖凝胶电泳检测 DNA双链断裂片段定性分析凋亡细胞 采用2%琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段。 4.统计分析: 结果表达采用均值加减标准差,统计分析采用双侧配对t检验,采用直线回归相关分析白细胞减少与凋亡细胞增加之间的相关性,p<0.05为有统计学意义。采用临床流行病学方法分析凋亡的检测用于预测白细胞减少的敏感性。 结 果 1.化疗前后末梢血白细胞总数及调亡的变化:患者化疗后白细胞减少,凋亡增加。患者化疗前及化疗第5天末梢静脉血白细胞总数分别为 5.19 ti.36 X 10’/L和 4.37 ti.56 X 10’/L,凋亡指数分别为4.of。2.59院和5.66。二.36阮,与化疗前比较,化疗后末梢静脉血白细胞数量减少及凋亡的百分比增加均具有显著性(P<0.05)。 2.琼脂糖凝胶电泳检测DNA双链断裂方法定性检测细胞凋亡,证实了 DNA双链断裂出现。 3.化疗前后末梢血白细胞总数与细胞凋亡变化的相关性:化疗前后末梢血白细胞总数与细胞凋亡变化的相关系数 R二 0.65 ·二· *<*05)。 4.使用临床流行病学分析方法检测细胞凋亡作为白细胞减少的早期诊断法的敏感性:灵敏度为82%,特异度为75%,准确度为 80阮,(p<0.05)。 结 论 1.化疗过程中细胞毒性药物介导的凋亡在一定程度上导致了化疗过程中伴随的白细胞减少。 2.白细胞减少与细胞凋亡增加之间具有一定的相关性。 3.凋亡的检测有助于评价白细胞的减少。