【目的】①克隆并构建广东分离株截短型人乳头瘤病毒58(HPV58) L1的毕赤酵母分泌型表达载体。②根据毕赤酵母偏爱密码子优化截短型HPV58 L1基因并对其在毕赤酵母中的表达进行研究。【方法】①利用PCR技术从宫颈癌组织中扩增出截短型HPV58L1基因,构建入毕赤酵母分泌表达载体pPICZaC,测序后进行序列分析和酶切鉴定。②根据毕赤酵母密码子使用偏好对广东分离株HPV58 L1基因进行密码子优化和测序鉴定。③将重组载体pPICZaC-HPV58L1及经过密码子优化的pPICZaC-mHPV58L1分别电转化入毕赤酵母GS115中,然后进行表型筛选和zeocin抗性筛选,对整合有目的基因的单克隆重组酵母菌株进行PCR鉴定。④甲醇诱导表达目的蛋白,最后通过SDS-PAGE及western blot鉴定目的蛋白在不同时间点及优化前后的表达情况。【结果】①成功扩增了广东分离株截短型HPV58L1基因；通过序列比对,广东分离株与GenBank上发表的日本分离株HPV58L1的基因序列(序列号D90400)一致。②对截短型HPV58L1基因的密码子进行优化,经测序鉴定,成功突变了18个碱基,优化了16个密码子。③成功构建了优化后的毕赤酵母分泌表达重组载体pPICZaC-mHPV58L1。④确定了重组酵母菌表达HPV58L1蛋白的最优条件：1%(v／v)甲醇,28℃,pH 5.0,诱导72小时表达量最高。⑤相同最优条件下,重组酵母菌GS115/pPICZaC-mHPV58L1的表达量高于GS115/pPICZaC-HPV58L 1。【结论】①广东分离株截短型HPV58L1与GenBank上发表的日本分离株HPV58L1的基因序列(序列号D90400)同一区域完全一致。②成功构建了优化后的毕赤酵母分泌表达重组载体pPICZaC-mHPV58L1。③确定了HPV58L1基因在毕赤酵母中优化表达的条件,酵母重组菌GS115/ pPICZaC-mHPV58L1的表达量高于GS115/pPICZaC-HPV58L1。