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轮状病毒(Rotavirus,RV)属于呼肠孤病毒科(Reovrridase)轮状病毒属(Rotaviras),是世界范围内引起婴幼儿传染性重症腹泻的主要病原。目前疫苗预防仍然是控制此病的最有效措施。转基因植物疫苗可以改变传统疫苗的接种方式和生产手段,而且能够降低疫苗的生产成本,具有广阔的应用前景。VP7是轮状病毒主要的外壳蛋白和中和抗原,在诱导中和抗体方面和在抗体保护性免疫中发挥重要作用,VP6在轮状病毒蛋白中含量最丰富,能诱导产生IgG抗体和IgA抗体,与保护性免疫有关。VP4属于蛋白酶敏感蛋白,是一种中和抗原,在病毒的致病性方面可能起重要作用,因此,用人源轮状病毒VP7,VP6和VP4基因作为抗原基因是研制可食用性疫苗的最佳选择。在此之前杨艳梅和郭荣通过试验已成功地得到了一个转VP7基因和一个转VP6基因胡萝卜的株系,但没有在蛋白水平上进行检验,况其“独生子”的遗传背景单一,可选择性差,所以有必要继续进行轮状病毒基因对胡萝卜的转化,以得到在蛋白的水平上表达量较高的株系。本试验在研究胡萝卜(Daucus carota L.var.sativa)组织培养的基础上,优化了以下胚轴为外植体的遗传转化系统。运用农杆菌介导法分别将轮状病毒基因VP7,VP6,VP4转入胡萝卜获得了T0代植株。又通过对T1代植株的有性杂交获得了同时含有VP7基因和VP6基因的T2代胡萝卜。主要研究结果如下:1.建立了完整的胡萝卜再生体系,确定种子的最佳灭菌条件是1%AgNO3振荡消毒15-20分钟;黑田五寸的最适愈伤诱导培养基及激素组合为B5+0.1mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT;MS培养基有利于再生植株的生根;再生植株在培养瓶中的炼苗时间以7～10天为宜。2.通过农杆菌介导法将VP7、VP6和VP4基因转入胡萝卜,同时建立了高效的胡萝卜遗传转化体系。7～9天苗龄的胡萝卜下胚轴侵染农杆菌10-20分钟,共培养2～3天后,转入附加80 mg/L Kan+500 mg/L Carb的愈伤诱导培养基上,待形成抗性愈伤后,继代到附加120 mg/L Kan+300 mg/L Carb的植株再生培养基上,50天后可得到Kan抗性苗。3.分别对VP7,VP6和VP4的卡那抗性植株70,68,68棵进行PCR检测,PCR阳性率分别为30%,22%和21%;对经PCR检测的阳性植株进行Southern-blot和RT-PCR检测,结果表明轮状病毒VP7,VP6,VP4基因已整合到胡萝卜基因组中并能够正常转录。4.对T1代的转VP7基因和转VP6基因的胡萝卜进行有性杂交,得到杂交种子。对长出的T2代植株进行PCR检测,证明已得到同时含有VP7基因和VP6基因的转基因胡萝卜。