山茶皂苷抗真菌作用研究

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本文研究从山茶科山茶属植物籽仁中提取的总皂苷,包括来源于茶的茶皂苷和来源于油茶的油茶皂苷,探讨两者的抗真菌作用。  山茶皂苷含量测定方法的建立,是迸一步研究其药理作用的前提和基础。本文建立了高效液相色谱法测定山茶皂苷含量的方法:茶皂苷的高效液相色谱法测定以甲醇-水(88∶12)为流动相,流速0.7mL·min-1,检测波长280nm,茶皂苷的保留时间约为4.80min。油茶皂苷的高效液相色谱法测定以甲醇-水(88∶12)为流动相,流速0.7ml·min-1,检测波长265nm,油茶皂苷的保留时间约为6.40min。分析结果显示:方法简便,分析快速,峰型理想,重现性好。  研究超声波辅助提取茶皂苷的方法,考察了乙醇浓度、料液比、超声时间、提取温度等因素对茶皂苷提取得率的影响。超声波提取茶皂苷的最佳工艺参数:提取溶剂70%乙醇,料液比1∶15,超声时间40分钟,提取温度60℃,茶皂苷收率18.06%。  山茶皂苷凝胶是以卡波姆为凝胶基质的水凝胶。分别对凝胶的外观、pH值、稳定性进行质量评价,对凝胶的体外释药进行研究。山茶皂苷凝胶处方:茶皂苷(或油茶皂苷)5.0g,卡波姆9401.0g,乙醇5mL,月桂氮卓酮0.5g,三乙醇胺适量,调节pH至5.0~6.0,水加至100g。茶皂苷凝胶和油茶皂苷凝胶均呈半透明状固体,质地均匀、细腻、粘稠度适宜、涂展性良好,体外释药理想。为制剂方面更深入的研发作了基础的可行性探讨。  考察山茶皂苷体外抗致病性真菌中的毛癣菌属的作用。采用美国国家临床实验室标准化委员会(CLSI)制定的液基稀释法测定茶皂苷和油茶皂苷体外对毛癣菌属中的致病菌——红色毛癣菌、紫色毛癣菌、须癣毛癣菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:茶皂苷体外抗红色毛癣菌MIC范围5~20μg·mL-1,抗紫色毛癣菌MIC范围2.5~10μg·mL-1,抗须癣毛癣菌MIC范围40~80μg·mL-1;油茶皂苷体外抗红色毛癣菌MIC范围1~16μg·mL-1,抗紫色毛癣菌MIC范围1~8μg·mL-1,抗须癣毛癣菌MIC范围4~16μg·mL-1。结果显示山茶皂苷(茶皂苷和油茶皂苷)有显著的体外抗毛癣菌属活性。  考察山茶皂苷体外抗致病性真菌中的念珠菌属作用。采用美国国家临床实验室标准化委员会(CLSI)制定的液基稀释法测定茶皂苷和油茶皂苷体外对念珠菌属中的致病菌——白念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:茶皂苷抗念珠菌属(Candida)MIC范围:80~320μg·mL-1。抗白念珠菌的MIC范围80~320μg·mL-1,抗光滑念珠菌MIC范围80~160μg·mL-1,抗近平滑念珠菌和克柔念珠菌MIC320μg·mL-1。油茶皂苷抗念珠菌属(Candida)MIC范围:16~128μg·mL-1。抗白念珠菌的MIC范围32~128μg·mL-1,抗光滑念珠菌MIC范围16~64μg·mL-1,抗近平滑念珠菌64~128μg·mL-1,抗克柔念珠菌MIC128μg·mL-1。结果显示山茶皂苷体外具有杀灭念珠菌作用,杀菌作用和山茶皂苷浓度相关。通过透射电镜(TEM)的观察,经山茶皂苷作用后,念珠菌细胞的结构发生明显的变化:细胞壁皱缩、破裂;细胞核异常;细胞质中可见较多空泡状结构;细胞中无完整细胞器结构。  考察山茶皂苷体内抗念珠菌作用。通过雌激素化小鼠阴道注入白念珠菌菌悬液建立小鼠白念珠菌性阴道炎模型,考察茶皂苷和油茶皂苷对实验性小鼠念珠菌性阴道炎感染的作用,以菌丝检出率、菌落计数(CFU)、外观症状、组织病理学改变作为评价指标。结果显示:山茶皂苷能减少小鼠体内念珠菌数量;改善局部症状;减轻组织病变。  综上所述,本文研究了山茶皂苷的提取、含量测定,制备了山茶皂苷水凝胶,评价了山茶皂苷体外抗致病性真菌中的毛癣菌属、念珠菌属作用,考察了山茶皂苷体内抗念珠菌作用。研究结果显示:山茶皂苷具有显著的抗真菌作用。我国山茶属植物资源丰富,广泛分布于长江以南地区。尤其是油茶,是我国独有的山茶科山茶属植物。作为来源于山茶属植物籽仁中的总皂苷,山茶皂苷是一种具有药学开发前景的天然产物,值得作进一步的研究。
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