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药物成瘾是一种长期、慢性、复发性的脑疾病。复吸是药物成瘾的一个重要特征，也是临床治疗药物成瘾遇到的最大难题，主要表现为强迫性觅药和用药行为反复出现。近年来，大量研究表明药物成瘾是一种病理性情感记忆。有研究表明破坏药物奖赏记忆的再巩固能够抑制觅药行为。应激在记忆获取、巩固、唤醒、再巩固发挥着重要的调节作用，但是它在药物奖赏记忆再巩固中的报道较少；活性调节细胞骨架蛋白（activity-regulated cytoskeleton-associated protein, Arc），常作为标记物用于检测整个脑区的神经元激活情况并参与学习记忆形成过程，尤其在各种记忆再巩固任务中起关键作用，然而它在药物奖赏记忆再巩固中的作用还未见报道。为此，本实验采用吗啡条件位置偏爱大鼠模型，观察应激是否损害吗啡奖赏记忆再巩固；在此基础上，进一步探讨其与脑内药物成瘾相关脑区—基底外侧杏仁核(BLA)、海马CA1区(CA1)、纹状体(Cpu)及前额叶皮质(PFC)中Arc表达的关系；为防治阿片类药物精神依赖，特别是复吸行为提供新的思路，并有助于深化理解阿片类药物奖赏记忆的神经生物学机制。研究内容如下：1观察应激损害吗啡奖赏记忆再巩固作用将吗啡条件性位置偏爱(Conditioned place preference, CPP)训练后且各组间获得测试CPP值没有显著性差异的40只大鼠，随机分成4组：(1)对照组，不暴露不应激；(2)暴露组，将大鼠放入吗啡伴药箱10分钟；(3)应激组，给大鼠5分钟冷水应激；(4)暴露+应激组，暴露10分钟后立即给予5分钟冷水应激。结果显示：对照组、暴露组及应激组大鼠处理后测试CPP值与各自的获得测试CPP值无显著性差异（P>0.05）；暴露+应激组大鼠处理后测试CPP值较其获得测试CPP值显著降低（P<0.05），其处理后测试CPP值亦显著低于其余三组（P<0.05）。为明确应激损害吗啡奖赏记忆是由于破坏了再巩固而不是消退所导致，本研究对暴露+应激组大鼠处理测试后24小时，给予低剂量(3mg·kg-1)吗啡点燃测试。结果显示：点燃测试CPP值与处理后测试CPP值无显著性差异（P>0.05）。为了排除条件位置偏爱不是大鼠喜欢伴药箱而是由于应激这种厌恶经历导致大鼠不喜欢到伴药箱，另设2组生理盐水训练组；一组暴露到A箱，另一组暴露到B箱，10分钟后立即给予冷水应激，24小时后，再测CPP值。结果显示：两组大鼠的获得测试CPP值和处理后测试CPP值无显著性差异(P>0.05)综上结果提示：吗啡奖赏记忆唤起后立即给予应激，其再巩固受到损害。2探讨应激损害吗啡奖赏记忆再巩固的时间窗将吗啡条件性位置偏爱训练后且组间获得测试CPP值没有显著性差异的14只大鼠，随机分为2组。(1)非暴露后6小时应激组：不暴露，过6小时后给予5分钟冷水应激；(2)暴露后6小时应激组：将大鼠放入吗啡伴药箱10分钟，过6小时后给予5分钟冷水应激。结果显示：两组处理后测试CPP值无显著性差异（P>0.05）；提示应激损害吗啡奖赏记忆再巩固作用可能存在时间窗。3分析应激损害吗啡奖赏记忆再巩固作用与脑内Arc表达的关系3.1免疫荧光法分析应激对吗啡CPP大鼠各相关脑区Arc表达的影响上述内容1中的40只大鼠，在处理测试后，每组随机抽取5只，快速灌注取脑，固定脱水后，用冰冻切片机自视交叉向后冠状位连续切片至PFC、CPu、CA1及BLA区域，每片厚度20μm，每隔5片取1张，每个标本取3张，每组共15张切片，采取免疫荧光法，分析应激对吗啡CPP大鼠各相关脑区Arc表达的影响。结果显示：在BLA、CA1、Cpu和PFC，暴露组及应激组大鼠的Arc阳性细胞数与对照组没有显著性差异（P>0.05），而暴露+应激组大鼠Arc阳性细胞数显著低于对照组（P<0.05）。3.2western blot法分析应激对吗啡CPP大鼠各相关脑区Arc表达的影响上述内容1中的40只大鼠，在处理测试后，每组随机抽取5只，快速断头取脑，采取核团定位取材法，选取含有BLA、CA1、CPu及PFC的脑区，应用western blot法，分析应激对吗啡CPP大鼠各相关脑区Arc表达的影响。结果显示：在BLA、CA1、Cpu和PFC，暴露组及应激组大鼠的Arc表达量与对照组没有显著性差异（P>0.05），而暴露+应激组大鼠Arc表达量显著低于对照组（P<0.05）。综合以上结果显示：大鼠吗啡奖赏记忆形成后，暴露唤起记忆再巩固及单纯应激时，脑内BLA、CA1、CPu及PFC中的Arc表达没有变化；暴露后给予应激，BLA、CA1、CPu和PFC中的Arc表达降低。提示：应激损害吗啡奖赏记忆再巩固可能与其降低脑内BLA、CA1、CPu和PFC的Arc表达有关。综上所述，本研究结论如下：1.应激可损害吗啡奖赏记忆再巩固，且首次发现其作用具有时间窗；2.首次发现，应激损害吗啡奖赏记忆再巩固可能与其降低脑内BLA、CA1、CPu和PFC的Arc表达有关。