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【目的】化学合成黑色素瘤抗原A3(melanoma antigenA3, MAGE-A3）的siRNA小干扰片段，转染人肝癌细胞株HepG2及Huh-7，观察MAGE-A3沉默后对人肝癌细胞HepG2、Huh-7的增殖凋亡、侵袭和迁移的影响，并初步阐明相关的分子机制，探讨MAGE-A3基因在人肝细胞癌发生、发展过程中所起的作用，为临床寻找小分子靶向治疗策略奠定基础。【方法】（1）化学合成MAGE-A3siRNA小干扰片段，转染HepG2及Huh-7细胞，实验分空转组（仅加转染试剂）、阴性对照组（加不相关小RNA）和MAGE-A3siRNA干扰组（干扰组），倒置荧光显微镜观察转染效率，Q-PCR和Western Blot技术检测siRNA转染后MAGE-A3基因及蛋白的表达情况；（2）MTT技术、Transwell迁移及侵袭实验分别检测HepG2、Huh-7各组细胞的生长增殖及迁移侵袭能力的变化；（3）流式细胞术（flow cytometry, FCM）分析HepG2和Huh-7各组细胞周期的变化和细胞的凋亡情况。（4）Q-PCR和Western Blot技术检测MAGE-A3基因沉默后肝癌细胞p53、bcl-2、survivin和bax的表达情况。【结果】1. Q-PCR检测肝癌细胞株HepG2、Huh-7、Hep3B及SK-Hep1的MAGE-A3基因表达水平，筛选MAGE-A3高表达的肝癌细胞株HepG2、Huh-7作为研究对象。2.化学合成的MAGE-A3siRNA片段转染肝癌细胞HepG2、Huh-74-6h后，倒置荧光显微镜可观察到微量荧光表达，24h转染效率达到80%，48h后，转染效率达到95%以上。3. MAGE-A3siRNA有效干扰片段的筛选：Q-PCR检测发现，MAGE-A3siRNA664片段转染HepG2、Huh-7细胞48h后，MAGE-A3基因沉默效率达70%以上，Western Blot检测也证实该片段转染48h后两株细胞的MAGE-A3蛋白表达水平明显降低。4. MAGE-A3siRNA干扰片段作用24h、48h、72h、96h、120h后，经MTT检测发现，干扰组与阴性对照组、空转组比较，HepG2、Huh-7细胞的增殖无明显差异。5.细胞迁移侵袭实验显示，MAGE-A3沉默后，HepG2、Huh-7细胞干扰组的迁移细胞数分别为42.8±7.12、21±1.78；HepG2、Huh-7细胞干扰组的侵袭细胞数分别为35.2±4.32、18±3.18，明显低于阴性对照组和空转组，差别有统计学意义（P<0.05）。提示沉默MAGE-A3基因能显著抑制HepG2、Huh-7细胞的迁移侵袭能力。6.流式细胞术（FCM）分析HepG2、Huh-7细胞周期，结果显示MAGE-A3基因沉默后，两株细胞G2期比例相对增多。表明MAGE-A3基因的沉默可使得肝癌细胞被阻滞于G2期。进一步应用Annexin V检测肝癌细胞凋亡情况，HepG2、Huh-7的凋亡细胞均增多，但以HepG2细胞为显著。7. Q-PCR和Western Blot技术检测MAGE-A3沉默后HepG2细胞p53、bcl-2、survivin和bax基因和蛋白的表达情况，发现下调MAGE-A3后p53、bax表达增加，而bcl-2、survivin表达下降。提示MAGE-A3沉默能诱导p53依赖的细胞凋亡通路。【结论】1.成功筛选MAGE-A3基因的siRNA干扰片段，明显抑制人肝癌细胞株HepG2与Huh-7MAGE-A3基因和蛋白的表达。2. MAGE-A3的沉默对肝癌细胞增殖无明显影响，但明显抑制了肝癌细胞的迁移侵袭能力，并诱导细胞凋亡。3. MAGE-A3沉默后抑制肝癌细胞侵袭、诱导细胞凋亡可能与增强p53表达，诱导p53依赖的细胞凋亡通路有关。