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下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)是哺乳动物生殖调控的关键,下丘脑产生分泌的GnRH通过门脉循环到达腺垂体,腺垂体是GnRH主要的靶器官,到达腺垂体的GnRH与其特异性受体结合后刺激促性腺激素LH和FSH的合成与释放,LH和FSH再通过血液循环到达睾丸和卵巢等性腺器官调节机体生殖活动。近年来研究发现,GnRH在下丘脑外许多组织器官也有分布和表达,LH在垂体外组织也广泛存在,提示GnRH和LH在机体内有更广泛的生理调节作用。在哺乳动物的黄体中也存在着GnRH和LH及其受体,并对卵巢功能具有直接的调节作用,这些研究主要集中在发情周期黄体,然而,关于GnRH和LH在妊娠期母猪黄体中的表达及作用研究,迄今尚未见报道。本研究首先采用Real-time RT-PCR和免疫组织化学方法检测GnRH和LH在妊娠期不同阶段母猪黄体中的表达和分布。然后,用GnRH和LH分别处理体外分离培养的妊娠前期黄体细胞,探索GnRH和LH对黄体细胞孕酮分泌的调节作用,以及GnRH对黄体细胞LH分泌和mRNA的影响,LH对黄体细胞GnRH分泌和mRNA的影响。研究取得如下结果:1.Real-time RT-PCR检测结果表明,在妊娠期不同阶段母猪黄体组织中均有GnRH mRNA的表达,妊娠前期和妊娠中期的水平显著高于妊娠后期(P<0.05),妊娠前期与妊娠中期之间没有显著差异(P>0.05)。免疫组织化学染色结果发现,GnRH广泛分布于妊娠期不同阶段母猪黄体组织,主要定位于黄体细胞的胞浆中,几乎所有的黄体细胞都呈GnRH免疫阳性反应。2.LH mRNA在妊娠期不同阶段母猪黄体组织均有表达,妊娠后期水平最低,显著低于妊娠前期和妊娠中期(P<0.05),妊娠前期与妊娠中期之间没有显著差异(P>0.05)。LH在妊娠期不同阶段母猪黄体组织的表达和分布与GnRH的表达和分布特征一致。在妊娠期不同阶段母猪黄体组织都有LH的表达,妊娠前期、中期和后期黄体细胞的胞浆中都有LH免疫阳性反应。3.不同浓度GnRH处理黄体细胞结果表明,GnRH剂量依赖性的促进黄体细胞孕酮的分泌。与空白对照组相比,10 pg/mL、100 pg/mL、1000 pg/mL和10000 pg/mL的GnRH处理都显著提高了培养液中孕酮的浓度(P<0.05)。GnRH处理黄体细胞,结果表明,1 pg/mL、10 pg/mL、100 pg/mL、1000 pg/mL和10000 pg/mL处理都能显著提高黄体细胞LH mRNA的水平和LH的分泌(P<0.05)。4.不同浓度LH处理黄体细胞结果表明,0.001 U/mL、0.01 U/mL、0.1 U/mL和1U/mL能显著促进黄体细胞孕酮的合成与分泌(P<0.05);0.1 U/mL和1 U/mL的LH处理黄体细胞能显著提高GnRH mRNA的水平和GnRH的分泌。本研究发现GnRH和LH mRNA在妊娠期不同阶段母猪黄体组织都有表达,其表达水平与妊娠期黄体功能一致。GnRH和LH在妊娠期不同阶段母猪黄体组织中均有分布,主要定位于黄体细胞的胞浆。GnRH处理黄体细胞,能剂量依赖性的促进孕酮和LH的分泌。LH处理黄体细胞,能提高GnRH mRNA水平,能促进孕酮和GnRH的分泌。研究结果表明,妊娠期母猪黄体具有产生分泌GnRH和LH的能力,妊娠黄体产生分泌的GnRH和LH以自分泌和(或)旁分泌的方式调节妊娠期黄体功能。