论文部分内容阅读
第一部分:乙酰辅酶A羧化酶A在上皮性卵巢癌组织中的表达及其意义 目的: 检测正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及上皮性卵巢癌组织中乙酰辅酶A羧化酶A(AcetylCoaCarboxylaseA，ACCA)中的表达及其意义。 方法: RT-PCR和Real-timePCR方法检测DNA水平各种卵巢组织中ACCA的表达。 结果: 正常卵巢组织中ACCA的相对表达含量为7.35±12.21％，良性卵巢肿瘤组织中ACCA的相对表达含量为39.76±14.87％，上皮性卵巢癌组织中ACCA的平均相对表达含量为42.86±13.44％，和正常卵巢组织相比差异有统计学意义(P＜0.05)，良性卵巢肿瘤组织和上皮性卵巢组织相比差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论: 良性卵巢肿瘤和上皮性卵巢癌组织中ACCA的表达明显高于正常卵巢组织，说明卵巢肿瘤组织中存在ACCA过表达，可能成为预测卵巢肿瘤的有效分子指标。 第二部分:TOFA抗卵巢癌细胞增殖活性及机制 目的: 探讨乙酰辅酶A羧化酶抑制剂TOFA对上皮性卵巢癌细胞及顺铂耐药亚株增殖效应、细胞周期及细胞凋亡的影响及其分子机制。 方法: 应用细胞增殖活性检测试剂盒(CCK-8)检测TOFA对上皮性卵巢癌细胞COG1及顺铂耐药细胞株COC1/DDP增殖抑制效应，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡的情况，Werternblot方法检测TOFA处理后上皮性卵巢癌细胞中PI3K/AKT及MAPK/ERK信号转导通路活性的变化，细胞周期蛋白凋亡相关蛋白表达变化。 结果: 1.不同浓度的TOFA(1、5、10、20、50μg/ml)分别作用24、48、72小时后，对COC1及COC1/DDP的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖。COC1和COC1/DDP细胞的IC50分别为26.10μg/ml和11.59μg/ml。 2.低浓度TOFA（10μg/ml）作用24、48、72小时后，能有效诱导COC1细胞发生G0/G1期阻滞，处于G0/G1期的细胞数分别为62.01％、55.84％和54.78％，对照组分别为29.92％、28.14％和34.55％，差异有统计学意义(P＜0.05)。TOFA对COC1/DDP无明显的细胞周期阻滞作用。 3.低浓度TOFA作用24、48、72小时后，能诱导细胞凋亡。10μg/mlTOFA作用COC1细胞后凋亡率为12.38％、42.59％、43.88％，和对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);5μg/mlTOFA作用COC1/DDP细胞48h、72h的凋亡率分别为32.16％、42.05％，和对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。 4.TOFA作用COC1细胞后，抑制MAPK/ERK通路活化，在COC1和COC1/DDP细胞中能激活Caspase-3蛋白，抑制凋亡抑制基因Bcl-2的表达;下调细胞周期相关蛋白CyclinD1及CDK4表达。 结论: TOFA能有效抑制卵巢癌细胞及顺铂耐药亚株增殖，呈时间和剂量依赖性;诱导细胞G0/G1期阻滞，和下调CyclinD1及CDK4蛋白表达相关;诱导细胞凋亡，激活Caspase-3凋亡通路，抑制Bcl-2蛋白表达;并下调ERK蛋白表达，TOFA发挥作用的机制可能与MAPK/ERK信号转导通路相关。 第三部分:TOFA增强卵巢癌细胞化疗敏感性的实验研究 目的: 探讨TOFA与紫杉醇(TAX)和顺铂(DDP)联合应用后对上皮性卵巢癌细胞及顺铂耐药亚株的增殖抑制效应、细胞周期及凋亡情况的影响。 方法: 应用细胞增殖活性检测试剂盒(CCK-8)检测不同浓度TOFA联合TAX和DDP对上皮性卵巢癌细胞及顺铂耐药亚株增殖抑制效应，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化。 结果: 1.TOFA和TAX联合应用后能有效抑制COC1细胞增殖，低浓度TOFA(5μg/ml)+TAX(25nM)组和TOFA(10μg/ml)+TAX(50nM)组作用48h及72h呈协同作用。TOFA(1μg/ml)+DDP(1μM)组和TOFA(5μg/ml)+DDP(5μM)联合48h及72h同样呈协同作用，与单一用药组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。TOFA和TAX、DDP联合后抑制COC1/DDP细胞增殖，并呈协同作用。 2.TOFA和TAX联合应用诱导COC1细胞G0/G1期阻滞，但对COC1/DDP细胞则诱导G2/M期阻滞;TOFA+DDP诱导COC1细胞和COC1/DDP细胞发生G2/M期阻滞。 3.TOFA+TAX组和TOFA+DDP组均可诱导COC1细胞和COC1/DDP细胞凋亡，并呈协同作用。 4.细胞经TOFA处理后，COC1对DDP和TAX的敏感性明显提高，对DDP和TAX的耐药倍数分别为0.36和0.21;TOFA处理的COC1/DDP细胞对TAX的敏感性明显提高，耐药倍数为0.44。但对DDP的敏感性降低，出现部分耐药，耐药倍数为1.31。 结论: TOFA+TAX组和TOFA+DDP组可有效抑制上皮性卵巢癌细胞COC1和顺铂耐药亚株COC1/DDP细胞增殖，并诱导不同细胞周期阻滞及细胞凋亡，呈协同作用。低剂量的TOFA和TAX及DDP联合后能更有效地抑制细胞增殖，诱导凋亡，为探讨新的化疗方案提供实验依据。 第四部分:TOFA对卵巢癌荷瘤小鼠的治疗作用 目的: 应用动物模型研究TOFA对卵巢癌荷瘤小鼠的治疗作用。 方法: 选取鼠龄4-5周，雌性、体重17-20gBALB/c裸小鼠，分别收集COC1和COC1/DDP细胞2×106个，100μlRPMI-1640培养基重悬，接种于裸小鼠双侧大腿外侧皮下。荷瘤裸鼠随机分为5组，每组5只:(1)对照组;(2)DMSO组（腹腔注射）;(3)TOFA处理组(50mg/kg);(4)DDP处理组（5mg/kg）;(5)TOFA和DDP联合处理组。每3天给一次药，腹腔注射，连续治疗2周。给药过程中检测裸鼠肿瘤体积，给药4周后处死。肿瘤体积计算公式为，体积=A×B2×0.5236（A:长，B:宽，单位为毫米）。 结果: 1.单纯应用TOFA治疗组和对照组相比无明显治疗效果，将TOFA和传统化疗药物DDP联合应用治疗COC1荷瘤小鼠后，和对照组相比，肿瘤体积明显减小(P＜0.05)，是对照组的48.3％（治疗后第27天）。 2.应用TOFA治疗COC1/DDP荷瘤小鼠后，和对照组相比，肿瘤体积明显减小(P＜0.05)，肿瘤体积是对照组的32.2％。 结论: 单纯应用TOFA治疗COC1荷瘤小鼠无明显治疗效果，TOFA和DDP联合应用后显著抑制裸小鼠肿瘤生长，TOFA可提高裸小鼠对顺铂的敏感性，起到协同治疗的作用。单纯应用TOFA对卵巢癌顺铂耐药亚株荷瘤小鼠有明显的治疗作用。