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目的探讨透明质酸(HA)、CD44对卵巢癌细胞Nanog基因表达的影响。
方法(1)应用RT-PCR方法检测SKOV-3细胞中存在Nanog基因,并通过序列测定明确该基因片段为Nanog基因。经Western-blot方法检测显示SKOV-3细胞中存在Nanog蛋白的表达。(2)影响SKOV-3细胞中Nanog蛋白表达相关因素。SKOV-3细胞培养液中添加HA培养5分钟;添加抗CD44抗体培养1小时后再添加HA继续培养5分钟。收集细胞并裂解,经Western-blot方法检测Nanog蛋白表达。(3)影响SKOV-3细胞核中Nanog蛋白表达相关因素。SKOV-3细胞培养液中添加HA培养30分钟;添加抗CD44抗体培养1小时后再添加HA继续培养30分钟;添加NanogsiRNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养30分钟;添加NanogcDNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养30分钟。收集细胞并裂解,分离出细胞核部分,经Western-blot方法检测Nanog蛋白表达。
结果SKOV-3细胞中存在Nanog基因。普通培养液、添加HA培养5分钟、添加抗CD44抗体培养1小时后再添加HA培养5分钟后,Nanog蛋白相对含量0.3645±0.0069,0.5965±0.0094,0.2386±0.0086,差异有统计学意义(P<0.05)。普通培养液、添加HA培养30分钟;添加抗CD44抗体培养1小时后再添加HA培养30分钟;添加NanogsiRNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养30分钟;添加NanogcDNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养30分钟,SKOV-3细胞中Nanog蛋白相对含量分别为0.2846±0.0047,0.5547±0.0104,0.1955±0.0117,0.0962±0.0086,0.6796±0.0053,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论HA、CD44促进卵巢癌细胞Nanog基因表达,在卵巢癌细胞生长、侵袭与转移中起到重要的作用。
方法(1)应用RT-PCR方法检测SKOV-3细胞中存在Nanog基因,并通过序列测定明确该基因片段为Nanog基因。经Western-blot方法检测显示SKOV-3细胞中存在Nanog蛋白的表达。(2)影响SKOV-3细胞中Nanog蛋白表达相关因素。SKOV-3细胞培养液中添加HA培养5分钟;添加抗CD44抗体培养1小时后再添加HA继续培养5分钟。收集细胞并裂解,经Western-blot方法检测Nanog蛋白表达。(3)影响SKOV-3细胞核中Nanog蛋白表达相关因素。SKOV-3细胞培养液中添加HA培养30分钟;添加抗CD44抗体培养1小时后再添加HA继续培养30分钟;添加NanogsiRNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养30分钟;添加NanogcDNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养30分钟。收集细胞并裂解,分离出细胞核部分,经Western-blot方法检测Nanog蛋白表达。
结果SKOV-3细胞中存在Nanog基因。普通培养液、添加HA培养5分钟、添加抗CD44抗体培养1小时后再添加HA培养5分钟后,Nanog蛋白相对含量0.3645±0.0069,0.5965±0.0094,0.2386±0.0086,差异有统计学意义(P<0.05)。普通培养液、添加HA培养30分钟;添加抗CD44抗体培养1小时后再添加HA培养30分钟;添加NanogsiRNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养30分钟;添加NanogcDNA转染试剂混合物培养48小时后,再加入HA继续培养30分钟,SKOV-3细胞中Nanog蛋白相对含量分别为0.2846±0.0047,0.5547±0.0104,0.1955±0.0117,0.0962±0.0086,0.6796±0.0053,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论HA、CD44促进卵巢癌细胞Nanog基因表达,在卵巢癌细胞生长、侵袭与转移中起到重要的作用。