DNA碱基结构特性可能被多种因素破坏,如果不及时修复,将会导致机体基因组的不稳定性而诱发癌变。对此,生物机体有相应的修复措施,如碱基切除修复路径(BER),这是一种高度保守的DNA切割活动,该路径由DNA糖基化酶来启动。尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是负责修复由尿嘧啶诱导的DNA损伤和维持基因组完整性的重要碱基切除修复酶,并且,UDG的异常表达与各种癌症有关。因此,精准检测UDG活性对于生物医学研究和临床诊断至关重要。目前,核酸的等温扩增技术在成为了一种有前途的超灵敏检测方法,该方法操作简便,可应用于超灵敏检测多种目标物,如蛋白质,细胞,小分子和离子。在这里,我们开发了一种超灵敏检测UDG活性的荧光方法,该方法包括(1)UDG驱动尿嘧啶切除修复,(2)切口酶介导的恒温指数扩增,(3)核糖核酸酶H(RNase H)诱导水解信号探针,产生荧光信号。UDG的存在使得能够从U-A碱基对中的U被去除,并产生无嘌呤/无嘧啶(AP)位点。核酸内切酶IV(Endo IV)随后裂解AP位点,破坏DNA底物。被切割的DNA底物同时起到了引物和模板的作用,启动了恒温指数扩增,产生大量的触发器。所产生的触发器可以选择性地与信号探针杂交,形成RNA-DNA异质双链体,随后加入的RNase H可以水解RNA-DNA异质双链体中的RNA,产生荧光信号。该检测方法具有超高的灵敏度,可以测量单个细胞水平上的UDG活性。此外,该方法还可应用于酶活动力学参数的测定和抑制剂的筛选,这为DNA修复酶的相关生物医学研究和临床诊断提供了强有力的工具。