研究目的:溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)统称为炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)。UC早期症状以血性腹泻为主,易反复发作,严重影响患者的生活质量,并增加结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)的发病风险。目前UC的治疗以抗炎和免疫调节为主,长期使用现有治疗药物会造成较为严重的副作用。因此,需要寻找新的有效低毒的药物来治疗IBD。有报道UC中NLRP3炎性小体被激活,相关机制有待于进一步阐明,且临床缺乏相关治疗药物。我们致力于寻找靶向NLRP3的药物。中药吴茱萸有温中止泻的作用。吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)是从吴茱萸的果实中提取的有效成分。前期结果显示,吴茱萸碱有抗炎作用。本研究旨在进一步明确:1.Evo是否对实验性UC损伤有保护作用;2.考察Evo对在UC中被激活的NLRP3炎性小体是否有抑制作用;3.探究Evo是通过何种机制影响NLRP3炎性小体从而起到改善UC症状的。方法:在饮水中给予小鼠7d 3%的DSS诱导急性UC模型,造模同时每天灌胃给予不同剂量的Evo(20、40及60 mg/kg)和阳性药物5-ASA(100 mg/kg),并设阴性对照组(po.0.5%CMC-Na)及单纯药物对照组Evo(60 mg/kg),共给药10 d,最后3 d用正常饮水替换DSS。每天称量小鼠,并观察小鼠的粪便稠度及肛门出血情况。给药10天后处死小鼠,取结肠。通过小鼠体重、结肠长度及苏木精-伊红(hematoxylin and esosin,HE)染色初步判断Evo对急性UC的改善作用;通过酶联免疫法(enzyme-linked immunoassay,ELISA)检测小鼠结肠组织中IL-1b、IL-18及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的含量及免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测小鼠结肠组织中炎性细胞CD11b的渗透来验证Evo对炎症的改善作用;在THP-1巨噬细胞中检测Evo对LPS及ATP刺激后NLRP3炎性小体的改变。用免疫印迹法检测到Evo影响自噬相关蛋白P62,LC3后,用免疫荧光明确Evo对自噬和炎性小体共定位的影响。通过分别干预自噬形成的不同时期后,检测Evo对NLRP3及炎性细胞因子的影响,揭示Evo抗炎的作用机制。结果:Evo能剂量依赖性地改善UC小鼠降低的体重、降低疾病活动指数(DAI)、增加结肠长度,并能修复UC小鼠的受损结肠组织结构。免疫荧光和ELISA的结果显示:给予Evo后,炎性细胞浸润减少,MPO水平降低,小鼠结肠炎性细胞因子IL-1b和IL-18含量降低。提示Evo有改善UC损伤的作用。Evo剂量依赖性地减少了LPS和ATP刺激的THP1细胞中IL-1β和IL-18细胞因子的释放,降低被激活的NLRP3炎性小体的蛋白表达。Evo也抑制了ASC的寡聚化、ASC的斑点形成及ASC与caspase1的共定位。这些结果表明Evo通过阻碍NLRP3炎性小体的组装而抑制了NLRP3炎性小体的激活。自噬相关蛋白P62,LC3的上调提示Evo促进了自噬的发生;抑制自噬后,Evo对NLRP3炎性小体的抑制作用减弱。结论:1.Evo对实验性UC损伤的保护是通过抗炎起作用的;2.Evo抑制NLRP3炎性小体的组装,从而抑制NLRP3的激活起到抗炎作用;3.Evo促进了自噬的发生、建立疾病状态下自噬与NLRP3的平衡,起到抗UC作用。4.在UC的治疗中,Evo可作为一种有潜力的候选药物。