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目的研究甜茶护齿含片对口腔致龋变形链球菌的葡糖基转移酶和水不溶性胞外多糖的影响,为开发利用以天然植物甜茶提取物为主要成分的甜茶护齿含片提供实验依据。方法1.配制变形链球菌菌悬液将冻干粉状标准菌株S.mutans于TSB培养基活化3h,后接种于MSB固体培养基37℃条件下厌氧培养48h,挑取典型菌落于无菌生理盐水制成菌悬液,并于540nm波长处调光密度值(Optical Density,OD)为1.0的菌悬液,用细菌计数板计算细菌的浓度,备用。2.甜茶护齿含片溶液的制备在无菌条件下将甜茶护齿含片研磨成粉末,溶于TTY液体培养基中并采用二倍稀释法将甜茶护齿含片配制成20g/50ml→0.165g/50ml的溶液。3.甜茶护齿含片对变形链球菌生长的影响采用试管稀释法测定甜茶护齿含片对S.mutans生长的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)大小,并离心收集各试管细菌,置于2ml生理盐水中,混匀,测OD540 nm值。4.提取葡萄糖基转移酶(Glucosyltransferase, GTF),测定其活力取MIC以下的5个浓度,用TTY液体培养基配制成不同浓度的甜茶护齿含片溶液各3ml,加入S.mutans菌液0.3ml,厌氧培养48h后离心,在上清液中加入固体硫酸铵,离心后收集沉淀并溶于磷酸盐缓冲液中,透析后获得GTF粗酶。分别采用考马斯亮蓝法(Bradford法)和Somogyi法测定总蛋白含量和酶-底物反应液中还原糖量。GTF活力单位(IU)定义为标准条件下(37℃反应1h)每分钟从蔗糖释放1μmol还原糖所需的酶量,并计算酶的比活力。5.测定水不溶性胞外多糖(Insoluble exopolysaccharides)含量将0.5mol/L的NaOH 5ml加入沉淀物(菌体)中离心,收集上清液并加入3倍体积的无水乙醇,离心后收集的沉淀即为反应生成的水不溶性胞外多糖,用蒽酮法测定水不溶性胞外多糖的含量。结果1、在试管稀释法实验中,甜茶护齿含片浓度在20g/50ml以上的培养基内无变链菌生长,浓度在10g/50ml以下的培养基内均有变链菌生长,溶液中变链菌的浓度随着甜茶护齿含片浓度的降低而增加。根据实验结果判定甜茶护齿含片MlC值是20g/50ml;且在甜茶护齿含片浓度高于或等于0.313g/50ml时,甜茶护齿含片组S.mutans的OD值均数低于阴性对照组(P<0.05),即当n≥0.313时对变链菌的生长有抑制性,且其抑制性随甜茶护齿含片浓度升高而增加。2、在甜茶护齿含片溶液对变形链球菌GTF活力影响的实验中,随着甜茶护齿含片浓度的升高,S.mutans酶液中总蛋白质的含量也随之增加。不同浓度甜茶护齿含片组总蛋白含量高于阴性对照组(P<0.05),甜茶护齿含片各浓度组各组间总蛋白含量的均数差异有统计学意义(P<0.05)。随着甜茶护齿含片溶液浓度的逐渐升高,S.mutans的GTF活力也随之降低。各甜茶护齿含片浓度组组间还原糖量、酶活力、比活力的均数差异上有统计学意义(P<0.05)；甜茶护齿含片各浓度组的还原糖量、酶活力、比活力均低于阴性对照组(P<0.05)。3、在甜茶护齿含片对变形链球菌水不溶性胞外多糖影响的实验中,随着甜茶护齿含片浓度的升高,S.mutans生成的水不溶性胞外多糖含量逐渐下降。甜茶护齿含片组与阴性对照组均数之间差异均有统计学意义(p<0.05),各甜茶护齿含片浓度组间S.mutans生成的水不溶性胞外多糖含量的总体均数差异有统计学意义(p<0.05)。结论1、甜茶护齿含片对S.mutans的生长有抑制作用。2、甜茶护齿含片可明显抑制S.mutans菌液中葡萄基转移酶的酶活力。3、甜茶护齿含片具有抑制S.mutans水不溶性胞外多糖的合成的作用。4、在龋病防治方面,甜茶护齿含片有望成为一种新型的、廉价的防龋保健品,具有一定的经济开发价值。