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目的:巨噬细胞具有极强的功能多样性,在机体的正常发育、体内平衡、组织修复以及对病原体的免疫反应中发挥着重要作用。同时,巨噬细胞是造血系统中可塑性最强的一种细胞,在体外单核细胞诱导成巨噬细胞过程中,细胞极性增强。巨噬细胞主要有两个亚类,即M1型和M2型。M1型巨噬细胞主要参与炎症反应,并且在宿主防御细菌和抵抗病毒感染中起着主导作用。M2型巨噬细胞和抗炎反应以及肿瘤疾病的发生发展相关。Hippo通路是近年来发现的一条进化高度保守的信号通路,YAP1作为其重要的共转录激活因子,在肿瘤的发生发展中起着调控作用,然而其在免疫细胞中的功能仍然鲜有报道。本研究在前期研究的基础上,以脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞M1型极化为研究模型,探讨YAP1对巨噬细胞M1型极化以及细胞极性改变的影响。研究方法:1.体外用LPS诱导建立巨噬细胞M1型极化模型,罗丹明-鬼笔环肽染色检测细胞骨架改变,qRT-PCR检测M1型巨噬细胞标记物的变化情况;2.GSEA分析极化过程中,9种经典的信号通路的富集情况;3.Western Blot检测极化过程中,YAP1的表达变化,qRT-PCR检测YAP1及其下游靶基因的转录;4.免疫荧光检测极化过程中YAP1的核定位情况;5.分离核、浆蛋白,Western Blot检测YAP1在胞浆及胞核的表达情况;6.qRT-PCR检测YAP1缺失对M1型巨噬细胞标志物表达的影响;7.Western Blot检测极化过程中,间质标志物的蛋白表达情况;8.Western Blot检测YAP1缺失对M1型巨噬细胞间质化的影响;9.Western Blot检测极化过程中,细胞干性相关因子的表达;10.生物信息学分析YAP1与细胞干性相关因子的相关性;11.Co-IP检测M1型巨噬细胞内YAP1和SOX2的相互作用;12.免疫荧光检测极化过程中,YAP1和SOX2在细胞内的定位。结果:1.巨噬细胞M1型极化模型的建立;2.生物信息学方法分析影响巨噬细胞M1型极化的信号通路;3.巨噬细胞M1型极化过程中,YAP1的表达升高;4.巨噬细胞M1型极化过程中,YAP1向细胞核内移动;5.YAP1调控巨噬细胞M1型极化标志物的表达;6.巨噬细胞M1型极化过程伴随着细胞间质标志物的表达升高;7.YAP1调控M1型巨噬细胞的间质标志物的表达;8.Snail调控M1型巨噬细胞的间质标志物的表达;9.巨噬细胞M1型极化过程伴随干细胞标志物的表达升高;10.巨噬细胞M1型极化过程中,YAP1/SOX2复合物向细胞核内移动。结论:1.YAP1可以调控巨噬细胞M1型极化和间质化;2.巨噬细胞M1型极化与间质化并行;3.巨噬细胞M1型极化过程中存在YAP1/SOX2复合物的细胞内异位。