针刺诱导缺血缺氧模型鼠皮层神经干细胞增殖分化的研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jamyi
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背景:新生儿缺血缺氧性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)是围产期脑损伤的主要原因,严重威胁着新生儿的生命和健康,主要表现为中枢性运动障碍及姿势异常,同时常伴有智力发育迟缓、学习困难、行为和情感异常等障碍?1-3?,是导致新生儿死亡或幸存者永久性神经功能损害、智能落后的重要原因之一。降低新生儿HIE死亡率及神经损害的发生,关键在于进行早期诊断、准确判断脑损伤程度,早期及时合理的治疗措施。研究表明磁共振扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)的成像技术在HIE的早期诊断、损伤程度判断等方面具有明显优势[4]。本课题组根据中医学理论,以“补先天之精,调后天之本,充脑髓,壮骨,解痉”为原则,在临床上采用针刺任脉、督脉及膀胱经联合治疗多例各型脑瘫患儿,均取得不同程度的改善甚或痊愈[5],为早期针刺治疗提供了明确的实践证据。  目的:本实验首先采用一侧结扎颈总动脉结合缺氧的方法制作新生乳鼠缺血缺氧脑损伤动物模型,然后应用7.0 T高场动物核磁共振扫描仪超早期观察并动态追踪活体模型鼠在不同干预因素处理后脑部的改变情况,探讨新生乳鼠缺血模型的评价方法,早期模拟临床针刺任脉、督脉及膀胱行针刺治疗;后期再应用水迷宫观察针刺前后实验鼠的空间学习及记忆能力变化;以期肯定针刺任脉、督脉及膀胱经等穴位的确切疗效,探讨针刺疗法对于HIE的预后的影响,并为针刺治疗HIE的作用机理提供实验依据。  方法:新生7日龄SD幼鼠结扎左侧颈总动脉并缺氧2小时制作新生鼠缺血缺氧性脑病模型,实验动物随机分为正常组,模型组,针刺治疗组及随意针刺组,模型建立后第二天起予针刺治疗,随意针刺组无原则实施针刺,治疗组及随意针刺组均每天针刺一次,模型组及正常组不做针灸处理。在模型建立完成后12h内行头部MRI扫描,观察模型建立成功与否以及缺血缺氧病灶累及范围,同时测定病灶中心的表观扩散系数(ADC值),各组大鼠在针刺治疗后14天、28周和2月分别用磁共振(MRI)动态观察其皮层发育情况,计算病灶部位皮层厚度,并比较各组之间的差异。应用GFP立体定位显微活体注射标记增殖分裂的细胞,并用免疫荧光观察脑皮层神经元标记物MAP-2的表达,比较各组阳性细胞数目之间的差异。并在针刺治疗后28天,水迷宫实验观察针刺后模型动物的行为变化,分别观察穿越平台次数及在目的象限停留时间这两个敏感指标,并比较各组之间的差异。  结果:  1.MRI扫描提示模型建立成功,观看到缺血缺氧病灶累及皮层及海马等层面,测量病灶中心区ADC值为(3.351±0.094)x10-4mm2/s,低于重度缺血缺氧最终平均ADC值范围。  2. MRI动态观察缺血缺氧模型鼠脑内皮层厚度变化情况:治疗组与其他两组实验组不同时间段的皮层厚度对比,在针刺治疗14天后,治疗组与模型组、随机针刺组比较 P<0.05;在针刺治疗28天后,治疗组与模型组、随机针刺组比较 P<0.01;在针刺治疗2月后,治疗组与模型组、随机针刺组比较 P<0.01,差别有统计学意义。  3. GFP转染情况:治疗组中携带GFP阳性细胞数目比正常组、模型组及随意针刺组明显增多,P<0.01,差异有统计学意义。  4.免疫荧光染色情况:治疗组中MAP-2阳性细胞数目比正常组、模型组及随意针刺组明显增多,P<0.01,差异有统计学意义。  5.在水迷宫行为学实验中,治疗组穿越平台次数及在目的象限停留时间优于其他两组实验组,P<0.05,差别有统计学意义。  结论:磁共振可以作为一种无创性中枢神经系统监测手段用于超早期观察缺血缺氧脑损伤程度及病灶受累及部位、范围,并可为针刺治疗提供动态的、直观的评估,极具临床意义。本实验通过大体形态、HE染色镜下观察及MRI扫描,纵观三种方法所得的结果互相吻合,动物发育情况及病理染色显示用改良的建模方法建立的动物模型脑部缺血缺氧病理变化确切,说明新生大鼠HIE模型建立成功。针刺任督二脉及膀胱经能促进HIE模型鼠皮层及海马神经干细胞的增殖分裂潜能,经治疗后新生的神经干细胞能大部分分化为神经元,提示在缺血缺氧中丧失的神经元可能在针刺后由新生的神经细胞得到有效地补充,从而改善HIE模型鼠行为及学习记忆能力,能改善HIE动物的预后。
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