酪醇是天然的多酚类化合物,具有抗氧化、抗衰老、降低高原反应、保护神经系统、提高免疫力等多种生理药理功效。由于其优异的生理活性以及在食品与保健品行业展现的巨大潜力,酪醇的需求也日益增加。目前,酪醇的主要制备方法为从植物中提取;但较低的酪醇含量及植物苛刻的生长要求,大大降低了提取的效率;酪醇的产量因此受到了极大的限制。随着微生物代谢工程的发展,酪醇合成途径渐为明晰,改造微生物发酵合成酪醇成为可能。除此之外,研究者发现酪醇也是羟基酪醇等具有重要价值的天然产物的直接前体物质。因此,建立一个高产酪醇的菌株具有重要意义。本文从微生物工厂的角度,在大肠杆菌（Escherichia coli）中引入一条酪醇合成途径,进行酪醇的微生物法合成,本文主要研究内容如下:（1）以E.coli BL21（DE3）为出发菌株,使用组成型启动子过量表达来自拟南芥（Petroselinum crispum）的芳香醛合成酶AAS,使工程菌株积累酪醇105.97 mg·L-1;阻断酪醇代谢途径中的主要分支代谢途径使产量提升至1055.36 mg·L-1。本研究将质粒p RSFDuet-1中的诱导型的T7启动子替换为组成型启动子Pcsp A来过量表达Pc AAS,在引入了酪醇的异源合成途径的同时,也避免了发酵过程中诱导剂的添加。利用CRISPR/Cas9手段敲除途径中的fea B基因,最终在缺失了5个分支代谢途径的6个基因（tyr R、pts G、crr、pyk F、phe A及fea B）的菌株中过量表达上述重组质粒,使酪醇产量提升了895.90%至1055.36 mg·L-1。（2）对酪醇代谢途径中的乙醇脱氢酶进行筛选使产量提升至1516.86 mg·L-1;并基于启动子组合调控策略对途径中的关键酶的表达量进行调节使酪醇产量提升至1810.46 mg·L-1。本研究为进一步强化代谢流,将大肠杆菌（E.coli）来源的乙醇脱氢酶Adh E、Adh P、Yah K及Frm A和酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）来源的ADH6进行了比较。结果表明,Sc ADH6表现出最适宜酪醇生产的脱氢酶活性,产生了1516.86 mg·L-1酪醇;产量较未过量表达该乙醇脱氢酶提升了43.73%。为使代谢流得到更好地平衡,使用高强度、中强度以及低强度的启动子分别过量表达途径中的关键酶Pc AAS和Sc ADH6;最终发现使用中强度启动子Pcsp A过量表达Pc AAS及Pyje FE低强度启动子过量表达Sc ADH6为最佳组合,酪醇产量提升了19.40%。（3）针对得到的具有酪醇生产能力的工程菌株进行发酵过程优化,使酪醇产量提升至2120.58 mg·L-1,较优化前提升了17.13%。本研究将发酵培养方式（接种量及培养温度）、发酵培养基(碳源浓度、氮源浓度、Ca CO3浓度、Mg2+、Ca2+以及柠檬酸)对产物积累的影响纳入考量;得到了较优的碳源配比,并发现Ca CO3的添加益于酪醇的生产。经探究得到的最优培养基组分为:葡萄糖25 g·L-1,甘油20 g·L-1,（NH4）2SO4 7.5 g·L-1,K2HPO4·3H2O 3 g·L-1,KH2PO42 g·L-1,Mg SO4·7H2O 2.0 g·L-1,柠檬酸钠1.0 g·L-1,维生素B1 0.1 g·L-1,酵母粉7 g·L-1,Ca CO3 5 g·L-1,微量元素营养液1 m L·L-1。研究结果为后续采用发酵法生产酪醇和相关的下游产物奠定了良好基础。