2,4,6-三氯酚厌氧降解菌的筛选、鉴定及其脱氯特性研究

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氯酚是苯酚环状结构上一定数目的氢原子被氯原子取代的酚类化合物,是一类持久性有机污染物,具有强生物毒性、生物积累性和生物难降解性,以及“致癌、致畸、致突变”三致效应,对人类健康和生态环境构成严重威胁。厌氧微生物降解是一种低成本,高效率,低能耗,易操作,无二次污染的方法,但常规厌氧生物法对较高浓度的氯酚类废水耐受性不好,且降解效果较差,需要与其他技术联合处理使水质达标,而高效菌技术具有很好的生物降解性和耐受性,能针对性地降解较高浓度的氯酚,因此,本研究在厌氧条件下筛选氯酚高效降解菌,对其脱氯特性进行研究,为氯酚废水污染治理提供一定的指导依据。本研究从湖南岳阳造纸厂内循环厌氧反应器中取活性污泥,通过逐渐提高2,4,6-三氯酚(2,4,6-TCP)浓度的方法对污泥进行厌氧驯化,驯化后污泥能在10d内将30mg/L2,4,6-TCP完全降解。以该污泥上清液为种子菌液,采用梯度稀释法和平板划线分离技术对菌种进行筛选和纯化,经两次固液交替培养和反复多次平板纯化,得到8株生长良好且有效降解2,4,6-TCP的菌株,考察其对2,4,6-TCP的降解效果,从中筛选出一株降解2,4,6-TCP效率最高的菌株,将其命名为TB-1。通过形态学特征观察、生理生化特征鉴定及16S rDNA序列同源性分析,确定TB-1菌为假单胞菌属。实验考察了TB-1菌对2,4,6-TCP的降解条件,以及在最佳条件下2,4,6-TCP的降解效果。结果表明,TB-1菌降解2,4,6-TCP的最佳条件为:降解时间72h、2,4,6-TCP初始浓度30mg/L、温度30℃~35℃、pH7.5、接种量10%、辅助碳源为乙酸钠。在此条件下,TB-1菌3d将30mg/L2,4,6-TCP完全降解,将90mg/L2,4,6-TCP降解80%以上;5d将150mg/L2,4,6-TCP降解70%左右。实验采用气相色谱-质谱联用仪和高效液相色谱仪,测定TB-1菌厌氧降解2,4,6-TCP的中间产物,探讨了2,4,6-TCP的降解途径。结果表明,TB-1菌厌氧降解2,4,6-TCP的中间产物有2,4-二氯酚(2,4-DCP)和4-氯酚(4-MCP);推测降解途径为:2,4,6-TCP首先脱去邻位的一个氯取代基生成2,4-DCP,然后脱去邻位另一个氯取代基生成4-MCP,即2,4,6-TCP→2,4-DCP→4-MCP。
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