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中老年男性雄激素部分缺乏综合症(partialandrogendeficiencyoftheagingmale，PADAM)是指中老年男性血清中雄激素水平下降和/或由于靶器官的雄激素受体的异常导致的对睾酮及其活性代谢产物敏感性下降为特征的一系列临床症状，包括：体力衰退、肌力下降、体毛减少、性欲减退、性活动减少和勃起功能障碍(ED)发生的频率增加、情绪不稳定、易怒、抑郁、失眠、潮热、过度出汗等。
目前对PADAM的治疗主要是雄激素替代治疗，有明显的疗效，但也存在明显的不足之处：(1)睾酮替代治疗是一项长期的治疗，而体内雄激素的靶细胞较多，长期的治疗难免会有毒副作用发生，尤其是前列腺；(2)血睾酮水平的个体差异很大，睾酮替代治疗应将血睾酮水平控制在正常的范围之内，避免血睾酮水平过高，因此睾酮替代治疗应该是个体化治疗，并定期根据有关的指标进行调整，病人需要频繁的检查和调整药物剂量，不方便进行治疗；(3)正常人体内的雄激素分泌是有晨高夜低的自然节律，目前的制剂均不能模拟这一节律，目前尚不清楚若长期破坏这一自然节律对人体的作用；(4)长期服用外源性雄激素，可能抑制自身睾丸的激素分泌和生精功能。
目前认为睾丸间质细胞(Leydig细胞)数目减少和功能减退是PADAM的主要病因之一。Leydig细胞无组织相容性抗原(HLA抗原)表达，具有免疫豁免特性，移植后不引起免疫排斥反应，无需应用免疫抑制剂，使其比一般的组织器官移植有无可比拟的优越性。但睾丸间质中还含有很多表面有HLA抗原表达的巨噬细胞和血管内皮细胞等，这些细胞在移植后会诱导受者的免疫系统产生排斥反应。由此我们提出利用体外分离、培养的方法尽可能的去除那些有免疫原性的细胞，获得高纯度和具有良好睾酮分泌功能的睾丸间质细胞，并进行同种睾丸间质细胞移植，治疗中老年男性雄激素部分缺乏症(PADAM)，试图探索出一种更简便、有效、符合人体生理功能的治疗手段。
第一部分 大鼠、成人睾丸间质细胞的体外分离、培养和鉴定的实验研究
方法：先利用大鼠的睾丸进行试验，待建立了有效的体外分离、纯化睾丸间质细胞的方法后，再利用成人的睾丸进行试验。
(一)大鼠睾丸间质细胞的分离、纯化：6月龄SD大鼠断颈处死，在冰面上将大鼠睾丸被膜和血管剔除后，Ⅱ型胶原酶消化，用250目筛网过滤，混合细胞悬液经4个密度梯度(从下往上依次为60％、34％、26％、21％)的Percoll液梯度离心，离心后取第3个细胞带的细胞进行培养。
(二)获得的大鼠睾丸间质细胞的鉴定：用台盼兰染色和3β-HSD染色鉴定细胞的活力。每天换液前取培养基上清液0.5ml，用睾酮放免试剂盒检测睾酮的浓度，动态观察体外培养的大鼠睾丸间质细胞的分泌功能。
(三)成人睾丸间质细胞的分离、纯化：从因意外死亡的健康成年男性取出睾丸，热缺血时间＜30分钟，冷缺血时间＜3小时。在冰面上将睾丸被膜和血管剔除后，Ⅱ型胶原酶消化，用250目筛网过滤，混合细胞悬液经4个密度梯度(从下往上依次为60％、34％、26％、21％)的Percoll液梯度离心，离心后取第3个细胞带的细胞进行培养。
(四)获得的成人睾丸间质细胞的鉴定：用台盼兰染色和3β-HSD染色鉴定细胞的活力。每天换液前取培养基上清液0.5ml，用睾酮放免试剂盒检测睾酮的浓度，动态观察体外培养的成人睾丸间质细胞的分泌功能。将体外培养的成人睾丸间质细胞分为4组(每组12份)：分别用不同浓度(0，4，10，50IU/ml)的HCG刺激，连续收集培养基上清液0.5ml，用睾酮放免试剂盒检测睾酮的浓度。
结果(一)体外分离纯化的大鼠睾丸间质细胞鉴定结果含3β-HSD的间质细胞的纯度为90％以上，活细胞亦达到90％。通过动态测定培养液中的睾酮浓度，发现由我们的方法分离纯化的大鼠睾丸间质细胞有良好的分泌功能，其分泌能力在体外培养1天时达到高峰，上清液中睾酮浓度为167.63±39.42ng/dl，106cells，之后其分泌能力逐渐下降，到体外培养的第4天，其分泌能力已很低了，培养液中睾酮的浓度仅为高峰时的1/20(为7.06±4.35ng/dl，106cells)。
(二)体外分离纯化的成人睾丸间质细胞鉴定结果分离后含3β-HSD的细胞纯度为70％左右，接种72小时后用胰蛋白酶消化培养瓶中已贴壁的细胞，取细胞悬液染色，细胞纯度达95％。活细胞亦达到90％。体外培养的成人睾丸间质细胞的分泌功能与大鼠的类似，都是在体外培养的24小时达到高峰，其后逐渐下降，但其持续分泌的能力较大鼠的强，其培养的第4天，分泌能力仍有高峰时的1/10。
(三)体外培养的成人睾丸间质细胞对HCG刺激的反应HCG对体外培养的成人睾丸间质细胞的分泌功能有明显的增强作用，并且该增强作用随HCG的浓度增加而呈数倍的增加。培养第一天对照组培养液中睾酮浓度为271.47±143.88ng/dl,106clls，而50Iu/mlHCG组则为2488.62±154.24ng/dl，106clls，两者相差约10倍。(P＜0.01)结果还可见在加大HCG的浓度后，虽然成人睾丸间质细胞的分泌功能的高峰仍在24小时，但其持续分泌睾酮的能力得到很大的提高。
结论：1、我们建立了一种成人、大鼠睾丸间质细胞的体外分离和纯化技术，首次采用4个浓度(60％、34％、26％、21％)的Percoll液密度梯度离心法，可得到高纯度(＞90％)、高细胞活力(＞90％)、有良好分泌睾酮能力的成人和大鼠的睾丸间质细胞。
2、我们分离的成人、大鼠睾丸间质细胞在体外培养时，仍能在一定时间内保持其原有的分泌睾酮的生理功能，但其分泌能力在24小时时达到高峰后，逐渐减退。
3、HCG能刺激体外培养的成人睾丸间质细胞的睾酮分泌能力，减慢睾丸间质细胞的分泌睾酮的功能的减退速度，并且这种能力随HCG浓度的增长而增强。
第二部分 老年大鼠睾丸间质细胞的同种异体移植的研究
方法(一)成年SD大鼠和老年SD大鼠各25只，分别取血测定血游离睾酮和总睾酮的浓度。
(二)老年SD大鼠睾丸间质细胞的同种异体移植取10只老年SD大鼠，进行睾丸间质细胞的同种异体移植。将培养了48小时的睾丸间质细胞取出，用血细胞计数板计数，并用3β-HSD染色。细胞的数量约为1×106个，纯度为95％左右。用注射器注射于老年SD大鼠大腿内侧肌群。分别于移植前1天、移植后2天、7天、12天、17天、22天、27天取血1ml，测定睾酮和游离睾酮的浓度。取血时观察注射部位的情况。
结果(一)老年SD大鼠的血睾酮浓度和游离睾酮浓度分别为87.4±28.2ng/dl和2.4±1.7pg/ml，成年SD大鼠的血睾酮浓度和游离睾酮浓度分别为321.4±175.6ng/dl和7.0±2.9pg/ml，老年SD大鼠的血睾酮和游离睾酮均比成年SD大鼠显著降低，P＜0.01。
(二)老年SD大鼠在进行了同种异体睾丸间质细胞移植后，血睾酮和游离睾酮的水平均显著升高。治疗前分别为87.4±28.2ng/dl和2.4±1.7pg/ml，移植后12天分别达315.88±89.05ng/dl和7.31±2.11pg/ml，与成年SD大鼠的血睾酮和游离睾酮浓度相仿，并且移植的睾丸间质细胞维持分泌睾酮的能力明显增强，在移植后27天，血睾酮和游离睾酮仍位于较高的水平(294.96±87.24ng/dl和7.48±1.93pg/ml)。
(三)注射部位未见明显的异常，未观察到明显的毒副作用。结论1、老年SD大鼠体内总睾酮和游离睾酮的水平分别为87.4±28.2ng/dl和2.4±1.7pg/ml，显著低于成年SD大鼠，P＜0.01。
2、老年SD大鼠在进行了同种异体睾丸间质细胞移植后，血睾酮、游离睾酮均显著逐渐升高至青年SD大鼠的水平，大约在移植后12天达到稳定期，并可持续到移植后27天。可以应用睾丸间质细胞的移植来治疗PADAM。
3、老年SD大鼠在进行同种异体睾丸间质细胞移植后，无需应用免疫抑制剂，其移植的睾丸间质细胞能保持持续的分泌睾酮的能力，其持续时间明显长于体外培养和单次的HCG刺激后。
4、睾丸间质细胞移植安全、有效、无明显的毒副作用。