【摘 要】
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脂氢过氧化物裂解酶(hydroperoxide lyase, HPL)是脂氧化途径中脂氧合酶(lipoxygenase, LOX)下游反应的一个关键性酶,其催化生成的短链挥发性醛及相应的醇与植物抗病虫、抗伤
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脂氢过氧化物裂解酶(hydroperoxide lyase, HPL)是脂氧化途径中脂氧合酶(lipoxygenase, LOX)下游反应的一个关键性酶,其催化生成的短链挥发性醛及相应的醇与植物抗病虫、抗伤害、贮藏、老化等生理进程有关,同时也是植物特异性气味的主要成分之一,被广泛用于食品和香水的添加剂,有较高的经济价值。因此,通过生物技术手段提高果蔬香气,目前已成为改善果蔬品质的重要手段。本研究通过构建超表达载体pCAMBIA2300-35S-HPL-Tnos和组织特异性表达载体pCAMBIA2300-RJ39-HPL-Tnos,并将其分别转入生菜和草莓中。主要研究工作如下：1、提取枸橘(Ponarus trifoliata)总RNA,逆转录成cDNA。根据NCBI上已登录的HPL基因序列设计引物,克隆获得HPL基因片段。测序结果显示：所克隆的基因序列与金柑玛格丽塔的同源性为99.13%,与柑橘克莱门的同源性为99%,与甜橙的同源性为98.8%。2、根据RJ39基因序列,设计含Hind Ⅲ和Sma Ⅰ酶切位点的引物,以质粒pCAMBIA3300-RJ39-RS-Tnos为模板,采用PCR方法获得果实特异性启动子RJ39。3、构建植物超表达载体pCAMBIA2300-35S-HPL-Tnos和组织特异性表达载体pCAMBIA2300-RJ39-HPL-Tnos,通过农杆菌介导法分别转化生菜和草莓。4、通过PCR和Southern杂交鉴定HPL基因已经转化到生菜和草莓中,通过RT-PCR和Northern杂交鉴定HPL基因能在生菜中正常转录。
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