基于RNA核酸适配体亲和捕获和酶催化反应检测凝血酶

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第一章:介绍了凝血酶检测的意义,核酸适配体的筛选及特点,特别是凝血酶核酸适配体的特点;简单介绍了基于适配体的凝血酶检测方法;最后本章还阐述了本论文的立题背景、主要研究内容以及创新点。  第二章:本章利用磁球的预富集功能,Toggle-25适配体的亲和性捕获,凝血酶的催化裂解多肽底物发展了检测凝血酶的方法,来拓宽Toggle-25适配体的分析应用。基于荧光底物的凝血酶检测方法中,凝血酶检测的线性范围为0.01-25pM,检测限为10fM。基于生色底物的凝血酶检测方法中,凝血酶检出限为0.25pM。在这两种方法中,稀释人血清或人血浆中的凝血酶可以被成功测定。人血清白蛋白,牛血红蛋白,溶菌酶不影响凝血酶的检测。本方法具有高特异性。结果表明Toggle-25适配体是DNA适配体一个很好的替代物,可作为亲和配体用于凝血酶的检测。  第三章:采用与上一章相似的检测原理,利用基于微孔板的方法在高通量快速检测分析方面的优势,我们发展了基于Toggle-25适配体的微孔板检测凝血酶的方法。将Toggle-25适配体修饰到微孔板上捕获试样中的凝血酶,然后捕获的凝血酶催化荧光底物或生色底物生成产物。最后通过测定信号强度,可实现对凝血酶的定量检测。使用荧光底物的实验中,100μL凝血酶样品的检出限仍为10fM。基于生色底物的凝血酶检测方法中,100μL凝血酶样品的检出限为0.25pM。凝血酶检测不受人血清白蛋白,牛血红蛋白,溶菌酶的影响。本方法可以成功应用到稀释人血清或人血浆中凝血酶的检测。
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