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目的采用HPLC法建立不同产地黄芪指纹图谱,对黄芪黄酮类成分(Astragalusflavonoids,AFS)进行谱效关系研究,确定各色谱峰代表的化学成分信息与耐缺氧、抗炎功效的关联程度,为黄芪多种有效成分的确定提供趋势预测和科学数据,为黄芪质量控制全面提升奠定基础。方法(1)采用HPLC/DAD法对12批次不同地产黄芪药材供试品进行分析,进一步优化色谱条件(洗脱梯度)并完成了系统的方法学考察,建立黄芪药材指纹图谱。运用“中药色谱指纹图谱相似性评价系统软件”,进行黄芪指纹图谱相似性评价。(2)通过大孔吸附树脂分别对六个不同地产黄芪(宁夏隆德县、宁夏彭阳县、宁夏固原市原州区、宁夏吴忠市红寺堡区、甘肃岷县麻子川乡、甘肃岷县梅乡镇)的黄酮类成分进行富集,得到不同产地黄芪药材黄酮类成分富集部位。(3)富集部位药效研究:以二甲苯致小鼠耳肿胀法测定耳肿胀度和肿胀抑制率来评价黄芪黄酮类成分抗炎作用;以小鼠耐缺氧实验记录延长存活时间来评价黄芪耐缺氧功效。(4)运用灰色关联分析法研究黄芪药材黄酮类成分富集部位指纹图谱特征峰所代表的化学成分信息与补气、抗炎药效的关系,最终根据关联度大小来确定指纹图谱特征峰所代表的化学成分对其药效作用贡献程度。结果(1)通过“中药色谱指纹图谱相似性评价系统软件”,标定出15个共有峰且以中位数法建立对照指纹图谱,计算出待测指纹图谱与对照图谱的整体相似度。即12批次不同地产的黄芪药材指纹图谱相似度分别是:赵楼村0.850;联财村0.966;联财北山0.946;阳坪村0.884;碱井村0.980;新民村0.978;康鲜种植基地0.987;开城梁0.951;沙塘铁虚沟0.920;清凉村0.901;城阳乡0.905;甘肃陇西0.858。(2)6个产地的黄芪药材经大孔吸附树脂富集得其黄酮类成分浸膏,分别为隆德县5.92g、彭阳县4.99、原州区6.21、红寺堡区5.66g、甘肃麻子川乡4.84g、甘肃梅乡镇5.63g,浸膏得率分别是11.84%、9.98%、12.42%、11.32%、9.68%、11.26%。HPLC法测定黄芪药材富集后指纹图谱,38min后无明显的吸收峰出现。(3)在二甲苯致小鼠耳肿胀实验中,与模型组比较,隆德县、彭阳县、原州区、红寺堡区、甘肃麻子川乡、甘肃梅乡镇6个不同地产黄芪富集得到的黄酮类物质有显著统计学意义(P<0.05)均有一定抗炎活性;在小鼠耐缺氧实验中,与空白对照组比较,隆德县、彭阳县、原州区、红寺堡区、甘肃麻子川乡、甘肃梅乡镇6个不同地产黄芪黄酮类物质有统计学意义(P<0.05),可有效延长小鼠存活时间。(4)对指纹图谱及药效学采用灰色关联分析法处理,结果如下:①15个共有特征峰与抗炎作用的关联度均大于0.6,说明黄芪富集部位的药效作用是所有化学成分共同作用的结果,且关联度大于0.92的物质的顺序为刺芒柄花苷>保留时间为21.6min的物质>毛蕊异黄酮苷,在黄芪黄酮类成分中刺芒柄花苷与其抗炎作用的关联度最大;②15个共有特征峰与耐缺氧功效的关联度均大于0.6,说明黄芪富集部得位的药效作用是所有化学成分共同作用的结果,关联度大于0.92的物质的顺序为刺芒柄花苷>毛蕊异黄酮苷>保留时间为21.6min的物质,在黄芪黄酮类成分中刺芒柄花苷与耐缺氧作用的关联度最大,其次是毛蕊异黄酮苷。结论(1)建立12批次不同地产黄芪HPLC指纹图谱并进行方法学考察和黄芪指纹图谱相似度评价,该方法简便易行,结果可靠;(2)通过D101大孔吸附树脂柱层析能有效地对黄芪黄酮类成分富集;(3)药效学试验表明,不同地产黄芪富集后得到的黄酮类成分均具有不同程度的抗炎功效;并首次发现了黄芪黄酮类成分也具有耐缺氧功效;(4)通过灰色关联分析确定黄芪黄酮类成分富集部位15种成分对耐缺氧、抗炎作用均有不同程度的影响,各成分对药效贡献程度有所差异,同时表明中药材发挥疗效并非某一种成分起到治疗作用,而是其物质群共同发挥作用的结果。