湖南省西瓜枯萎病菌遗传多样性及致病力的研究

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西瓜枯萎病是制约西瓜产业可持续发展的一种全球性真菌土传病害,由尖孢镰刀菌西瓜专化型所引起。本研究于西瓜枯萎病发病时期,从湖南省各个地区采集西瓜枯萎病株样本进行病菌的分离和纯化,以尖孢镰刀菌西瓜专化型生理小种标准菌株为标准,选取了具有枯萎病菌典型特征的77个菌株进行形态学鉴定及分子检测鉴定;并以西瓜感病品种“早佳8424”为寄主材料,利用菌土法对鉴定为尖孢镰刀菌西瓜专化型的菌株进行人工接种盆栽实验,对发病植株进行观察、记录,计算病情指数,并对菌株的致病力的强弱进行鉴定和评价;同时,对适合西瓜枯萎病菌遗传多样分析的SRAP-PCR引物进行筛选,采用SRAP分子标记技术对来自湖南省各个地区西瓜专化型菌株进行多态性分析。实验主要结果如下:1、从湖南省各地采集到的94份西瓜枯萎病植株样本中,共有77个病原菌被分离纯化,其中分离到的尖孢镰刀菌的数量是73个,尖孢镰刀菌西瓜专化型的数量为35个。2、西瓜枯萎病菌致病力强弱在湖南省不同地区存在明显的分化现象,其中来自湘东居群的FON1(湖南省长沙县高桥镇-2)、FON6(湖南省长沙县高桥镇-7)和FON11(湖南省长沙县高桥镇-13)菌株,来自湘西居群的FON26(湖南省张家界市永定区)、FON69(湖南省怀化市溆浦县)菌株以及来自湘中地区的FON73(湖南省娄底市双峰县)菌株的致病力最强;病情指数为100,湘南居群的FON70(湖南省郴州市临武县)菌株的致病力次之,病情指数为96.15;最弱的是来自湘北居群的FON51(湖南省岳阳市桃林寺镇)菌株,只能使西瓜轻微感病;其他所有菌株都能使西瓜感病。3、从225对SRAP-PCR随机引物中筛选出适合西瓜枯萎病菌遗传多样分析的15对扩增条带清晰、稳定性好、多态性高的引物组合。分别是:ME1+EM4、ME1+EM5、ME4+EM2、ME4+EM3、ME5+EM1、ME5+EM5、ME5+EM15、ME6+EM2、ME8+EM1、ME8+EM5、ME11+EM1、ME12+EM9、ME12+EM15、ME14+EM2、ME14+EM7。4、五个居群的35个西瓜枯萎病菌的遗传多样性用15对SRAP-PCR引物进行分析,共有261条带被扩增,其中有239条为多态性条带,每对引物平均扩增出位点数和多态性位点数分别为17.4、15.94个,其多态性比率达到了91.57%。POPGENE软件对数据的分析结果表明,在西瓜枯萎病菌居群水平上(Ne*=1.3205,h*=0.1855,I*=0.2738)具有丰富的遗传多样性及变异度,其中遗传多样性最高的居群是湘东居群。NTSYS软件计算菌株两两间的相似系数的结果表明,这35个尖孢镰刀菌西瓜专化型两两菌株之间的遗传相似系数范围为0.60~0.92之间,平均值为0.76。供试菌株的遗传分化从分子水平上来说较大,群体间也具有较丰富的遗传多样性。基于SRAP聚类分析的结果表明,供试菌株于遗传相似系数为0.60处被划分为2个类群,湘东居群的FON49(湖南省湘潭市湘潭县)菌株单独聚为一类。UPGMA聚类分析结果表明,亲缘关系最近的是来自湘中居群的FON73菌株(湖南省娄底市双峰县)和来自湘东居群的FON77菌株(湖南省株洲市株洲县),它们间的遗传相似系数最高,遗传距离最近,同时也说明它们之间的遗传差异最小。亲缘关系最远的是来自同一居群,湘东居群的FON49菌株(湖南省湘潭市湘潭县)和FON4菌株(湖南省长沙县高桥镇-5)。它们的遗传相似系数最低,遗传距离最远,也说明它们之间遗传差异最大。根据菌株的分布情况来看,它们间的遗传亲缘关系与菌株间地理分布及距离没有相关性。
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