HOXC6基因对胶质瘤细胞增殖与迁移的影响

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实验目的:本文主要研究同源盒家族中的Homeobox C6(HOXC6)在胶质瘤中的表达水平和高表达HOXC6的胶质瘤患者预后生存情况,继而研究HOXC6基因对胶质瘤U251、U87细胞增殖和迁移的影响,最后研究HOXC6基因对胶质瘤U251、U87细胞上皮-间质转化的影响。实验方法:在胶质瘤相关网络数据库上,分析HOXC6基因在胶质瘤细胞中的表达水平以及HOXC6基因表达高低与患者预后生存情况的关系,通过Western blot实验检测临床收集的胶质瘤标本中HOXC6基因的表达情况,利用靶向HOXC6基因的小干扰RNA(HOXC6si RNA1和si RNA2)转染胶质瘤U251和U87细胞,采用q RT-PCR检测细胞转染情况,通过CCK-8实验和克隆实验检测敲减HOXC6基因后对胶质瘤U251和U87细胞增殖的影响,通过划痕实验、Transwell小室实验检测敲减HOXC6基因对胶质瘤U251和U87细胞迁移的影响。最后通过Western blot实验检测敲减HOXC6基因对胶质瘤U251和U87细胞EMT的影响。实验结果:分析胶质瘤相关网络数据库得到HOXC6在WHO分型Ⅲ级Ⅳ级的胶质瘤(GBM)中的表达水平较正常脑组织中表达水平显著增高,且差异具有统计学意义(p<0.01),HOXC6基因在WHO分型Ⅰ级Ⅱ级的胶质瘤(LGG)中的表达水平较正常脑组织中的表达水平有所升高,差异具有统计学意义(P<0.05);在GBM中,高表达HOXC6基因的胶质瘤患者较低表达HOXC6基因的胶质瘤患者预后生存情况显著降低,其差异具有统计学意义(P<0.01),在LGG中,高表达HOXC6基因的患者同样较低表达HOXC6基因的患者预后生存情况显著降低,其差异具有统计学意义(P<0.01),将LGG与GBM统一分析,胶质瘤WHO分型的所有级别中高表达HOXC6基因的患者较低表达HOXC6基因的患者预后生存情况显著降低,其差异具有统计学意义(P<0.01);根据Western blot实验显示与正常脑组织相比,胶质瘤组织中的HOXC6蛋白表达水平显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);根据q RT-PCR实验显示在胶质瘤U251以及U87两个细胞株中si RNA control组与HOXC6 si RNA1、HOXC6 si RNA2组相比,si RNA control组的HOXC6的m RNA表达水平均显著高于HOXC6 si RNA1、HOXC6 si RNA2两组;CCK-8实验结果显示胶质瘤U251和U87细胞中si RNA control组与HOXC6 si RNA1、HOXC6 si RNA2相比,si RNA control组的细胞增殖显著高于HOXC6 si RNA1、HOXC6 si RNA2组,差异具有统计学意义(P<0.01);在克隆实验中显示胶质瘤U251和U87细胞中si RNA control组与HOXC6si RNA1、HOXC6 si RNA2相比,si RNA control组的细胞增殖显著高于HOXC6 si RNA1、HOXC6 si RNA2组,差异具有统计学意义(P<0.01);划痕实验及Transwell小室检测法显示胶质瘤U251和U87细胞中si RNA control组与HOXC6 si RNA1、HOXC6 si RNA2相比,si RNA control组的迁移能力显著强于HOXC6 si RNA1、HOXC6 si RNA2组,差异具有统计学意义(P<0.01);根据Western blot实验显示胶质瘤U251和U87细胞中si RNA control组与HOXC6 si RNA1、HOXC6 si RNA2相比,si RNA control组的N-cadherin的表达显著增加,E-cadherin表达显著降低,且差异均具有统计学意义(P?<0.05)。实验结论:1.HOXC6基因在胶质瘤中呈现出表达水平增高的情况,且HOXC6在胶质瘤细胞中的高表达与患者预后不良密切相关。2.HOXC6基因可以促进胶质瘤U251、U87细胞的增殖与转移。3.HOXC6基因可以通过EMT促进胶质瘤U251、U87的增殖与迁移。
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