紫花牡荆素对人卵巢癌HO-8910细胞活性氧生成和凋亡的影响

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目的:观察活性氧在紫花牡荆素(Casticin, CAS)诱导的人卵巢癌HO-8910细胞凋亡中的作用,探讨CAS诱导细胞调亡是否涉及活性氧介导的线粒体凋亡诱导信号途径。方法:1. Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CAS对人卵巢癌HO-8910细胞凋亡的影响;2. H2DCFH-DA探针FCM检测CAS对人卵巢癌HO-8910细胞活性氧生成影响;3.罗丹明123探针(Rhodamine123,Rh123)FCM分析CAS对人卵巢癌HO-8910细胞线粒体跨膜电位的影响;4. Western blot分析CAS对人卵巢癌HO-8910细胞Cyt C、Bax、Bcl-2蛋白表达和活性的影响。结果:1. Annexin V-FITC/PI双染色FCM分析结果显示CAS(2.0和4.0μg/mL)处理人卵巢癌HO-8910细胞48小时的细胞凋亡率分别为:9.46±0.95%,14.47±1.47%(p﹤0.01),明显高于10mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)预处理组(4.63±0.57%,5.30±0.50%)(p﹤0.01),及溶媒对照组(DMSO,0.3±0.10%);2. H2DCFH-DA荧光探针FCM分析结果表明CAS(2.0和4.0μg/mL)处理48小时的人卵巢癌HO-8910细胞H2DCFH-DA平均荧光强度分别为:36.73±1.52,57.53±2.83;明显高于联合NAC(10mmol/L)预处理细胞的平均荧光强度(13.63±1.25,14.63±1.60(P<0.05));3. Rh123探针标记FCM分析细胞内线粒体膜电位结果表明,CAS(2.0和4.0μg/mL)处理48小时的人卵巢癌HO-8910细胞Rh123平均荧光强度分别为12.73±1.25、18.20±1.49,明显低于NAC(10mmol/L)预处理组平均荧光强度(56.20±2.73,59.7±1.79),及溶媒对照组(0.2%DMSO,84.67±3.73)(P <0.01);4. Western blot分析结果显示经CAS(2.0和4.0μg/mL)处理48小时的人卵巢癌HO-8910细胞后Cyt C、Bax蛋白表达上调,平均相对灰度值分别为1.604±0.327,1.781±0.21(P <0.05)与1.311±0.325、1.665±0.030(P <0.05),相比溶媒对照组(1.258±0.456,1.047±0.356)有明显的统计学差异(P<0.05);而Bcl-2蛋白表达降低,平均相对灰度值为1.361±0.024,1.302±0.010(P <0.05),溶媒对照组为1.674±0.217。结论1. CAS能够诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡;2. CAS诱导细胞凋亡机制可能与促进细胞内ROS生成,激活线粒体凋亡途径相关。
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