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目的:宫颈癌是全球妇女中最常见的恶性肿瘤之一,仅次于乳腺癌。据国际癌症研究中心估计,2002年全世界有493000例新发病例,274000例死亡病例,其中83%的宫颈癌发生在发展中国家。近年来宫颈癌发病逐渐出现年轻化趋势,腺癌比例也有所上升。随着富颈癌发病年轻化及患者对治疗后生活质量要求的提高,化疗已由晚期姑息治疗转为有效的综合治疗。因此寻找高效低毒药物是提高化疗成功率和患者生存率、改善患者生活质量的关键。
天然中草药因其低毒高效特点已经成为国内外抗癌药物研发的热点,芍药苷是一种天然单萜类糖苷化合物,是传统中药赤芍的主要有效成分,具有抗炎、神经保护、镇痛、调节免疫等多种生物学效应,新近药理研究表明芍药苷具有潜在的抗肿瘤作用。然而其有无抗宫颈肿瘤效应及其作用机制尚不清楚。本研究通过体外培养人宫颈癌HeLa细胞,观察芍药苷对HeLa细胞增殖和凋亡作用的影响,为临床应用芍药苷治疗宫颈癌提供实验依据。
实验材料及方法:不同浓度芍药苷作用于人宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同时间HeLa细胞的生长抑制效应,计算出药物的半量抑制浓度(IC50),据此确定芍药苷适当浓度用于细胞凋亡及凋亡相关调控基因实验。膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率及细胞周期变化,透射电镜观察HeLa细胞形态变化,免疫细胞化学法检测芍药苷作用后HeLa细胞Bc1-2、Bax及Caspase-3表达的变化。
结果:不同浓度的芍药苷作用不同时间后,对子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率呈明显的浓度-时间依赖关系,在24、48、72h的IC50值分别为5054、2965、2459μg/ml;应用不同浓度芍药苷后HeLa细胞凋亡率逐渐增高,对照组及1000、2000μg/ml组凋亡率分别为0.94%、10.94%、13.95%,细胞周期S期比例呈增多趋势;芍药苷作用48h后透射电镜下可见HeLa细胞出现典型凋亡改变;芍药苷作用于HeLa细胞48h后,与对照组相比Bcl-2表达减少、Bax及Caspase-3表达增多。
结论:芍药苷能够诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,其作用机制可能与抗凋亡基因Bcl-2表达减弱及促凋亡基因Bax、Caspase-3表达增强有关。