蛋白A与人体免疫球蛋白具有高度的特异性结合能力,常用蛋白A为配体制备蛋白A免疫吸附材料、生物芯片或免疫传感器等。蛋白A免疫吸附材料可作为治疗自身免疫疾病的吸附剂,利用蛋白A可结合人免疫球蛋白的特性,通过体液免疫调节和细胞免疫调节达到缓解、控制病情的目的。为了缩减制药的制造成本,蛋白A吸附剂的吸附量是一个关键的因素。我们使用了一种定向固定的方法,利用巯基与马来酰亚胺基的特异性反应将重组蛋白A的碳端偶联在琼脂糖凝胶上。与随机法固定作了对比,随机法是利用重组蛋白A的氨基与醛基琼脂糖凝胶偶联。随机法与定向固定法的蛋白A偶联量有着明显的差别。定向固定中,蛋白A与琼脂糖凝胶反应的确定是使用Ellman试剂检测琼脂糖凝胶上的巯基。定向固定法合成的吸附剂对血浆中IgG的吸附量最大达到65.2mg/g,随机法合成的吸附剂仅为30mg/g,并且定点固定法超高的IgG结合能力优于现有商业蛋白A琼脂糖凝胶(约50mg/g)。蛋白质的取向对其固定化后的活性起着至关重要的作用,这些结果表明,位点特异性结合蛋白分子在功能上与IgG空间位阻相互作用弱,所提出的方法是合成具有高吸附能力的亲和吸附剂的一个很有前景的策略。合成多功能氨基环氧基填料,使用新的两步法来固定重组蛋白A:首先填料上的氨基通过物理吸附的方式,将蛋白A物理吸附于填料上,然后填料上位于蛋白A附近的环氧基与重组蛋白A本身的氨基发生共价反应,达到固定重组蛋白A的目的。此氨基环氧基填料与重组蛋白A的物理吸附发生的非常快,实验优化了此填料与蛋白A偶联的条件,最优条件为pH8的低浓度盐溶液(5mM)。当填料上的氨基为15μmol/g,环氧基在75μmol/g至80μmol/g间,在这个条件下填料与重组蛋白A的偶联率达到了90%,合成的吸附剂对IgG的静态吸附量达到为38.9mg/g。结果表明,该氨基环氧基琼脂糖凝胶在用于制备免疫吸附材料具有良好的应用前景。