论文部分内容阅读
近年来，借助固相原位合成技术或探针固定化技术制备微型基因芯片进行DNA杂交分析引起了人们的广泛兴趣。目前用作DNA微阵列原位合成的基片材料多为玻璃片和硅片等，而聚丙烯膜、尼龙膜等微孔膜大多用于点样法生物芯片的制备。但玻璃具有不易加工成特殊形状的缺点，而膜又有强的荧光背景。我们首先采用等离子体接枝技术对几种常见的有机聚合物材料进行了表面功能化改性，以探索新的易加工和更加实用的寡核苷酸原位合成基片材料。此外，还初步探索了时间分辨荧光方法在生物芯片杂交结果分析中的应用。 一、H2和N2混合气体等离子体处理聚丙烯微孔膜，采用扫描电镜观察了处理前后膜的形貌变化；真空全反射红外光谱、X-射线光电子能谱和紫外光谱证实在其表面接枝了大量活性氨基；用紫外光谱定量计算得知，所接枝的氨基密度为0.59μmol/cm2，远高于功能化玻璃上的氨基密度。该改性膜适合于DNA的原位合成，并可得到98％以上的偶联效率，是一种新型的DNA原位合成基材。 二、以正交试验法优化聚四氟乙烯等离子体处理条件，并对最佳条件下处理的聚四氟乙烯用X-射线光电子能谱和紫外光谱进行了表征确认。同时，在改性后的聚四氟乙烯上合成了寡核苷酸探针，利用其与荧光标记的靶序列杂交，分析了正配与错配序列在荧光强度上的区别。结果表明聚四氟乙烯是一类比聚丙烯微孔膜更理想的DNA原位合成基材。 三、合成了4,7-二氯磺酰苯基-1，10-菲罗啉-2，9-二羧酸（BCPDA），产物和中间产物均用红外光谱、核磁共振谱和元素分析进行了表征；而且通过条件优化，总产率达到了89.4％，比文献值提高了17.3％。同时，我们对BCPDA-Eu3+进行了荧光分析和时间分辨荧光测定。结果显示在10-12～10-8mol/L浓度范围内，螯合物的时间分辨荧光强度与浓度具有线性关系，从而可对联有BCPDA的靶序列进行定性和定量分析。