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研究背景:目前,在临床治疗肿瘤的过程中,细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)已被认为是一种有效的治疗手段。其具有增殖速度快、杀伤活性高、杀瘤谱广以及副作用小等特点,广泛应用于肾癌、黑色素瘤、肝癌、胃癌和白血病等多种恶性肿瘤的治疗。本研究团队在研究CIK细胞培养条件优化的过程中发现,赫赛汀不仅促进肿瘤患者外周血NK细胞的扩增,而且可促进NK样T细胞(CD3+CD56+)的扩增。目的:在传统培养方法的基础上,不断探索和研究提高CIK细胞数量和增加CIK细胞活性的方法,以获得高比例和高活性的CIK细胞。方法:1分离肺癌患者外周血淋巴细胞;2计数,按密度1×106/ml加入适量无血清细胞培养液(含10%自体血浆),并加入浓度为1 000U/ml的rhI FN-γ,等量接种于75 cm2培养瓶中;3包被抗体:实验分为两组,A组:预先包被mA b CD3于培养瓶中;B组:预先包被曲妥珠单抗和mA b CD3于培养瓶中;4次日将细胞从未包被抗体的培养瓶中转入包被抗体的培养瓶中,加入等倍体积的细胞培养液,并加入1 000 U/ml的rh IL-2;5第5天细胞转入培养袋中培养,并加入500 ml无血清细胞培养液(含1 000 U/ml的rhI L-2),第10天加入500 ml无血清细胞培养液(含1 000U/ml的rh IL-2)。培养至第14天收获细胞。结果:A组和B组细胞总数扩增倍数为:377±62倍和325±68倍,A组细胞中CD3+CD56+的比例由培养第0天的(6.34±2.13)%到第14天的(14.70±4.91)%,P<0.05,差异有统计学意义;B组细胞中CD3+CD56+的比例由培养第0天的6.34±2.13%到第14天的(48.94±6.64)%,P<0.05,差异有统计学意义;培养第14天A组细胞与B组细胞CD3+CD56+比例比较,P<0.05,差异有统计学意义。流式细胞术检测两组培养第14天CD3-CD56+细胞比例,分别为:(10.41±8.03)%和(19.35±10.80)%,P<0.05,差异有统计学意义。结论:曲妥珠单抗不仅可促进肿瘤患者外周血NK细胞的扩增,而且预先同时包被曲妥珠单抗和mA b CD3,培养14 d可获得高表达CD3+CD56+和高活性的CIK细胞。