【摘 要】
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通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性.将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆
【机 构】
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农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学,湖北武汉430070
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通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性.将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载体中,得到转移载体pTK-GM-CSF.将亲本病毒BHV-1gG/TK/EGFP+基因组与转移载体pTK-GM-CSF采用磷酸钙法共转染MDBK细胞,得到重组病毒BHV-1gG/TK/GM-CSF+.并对重组病毒的生物学特性和对日本大耳白兔的免疫原性进行了评价.利用PCR和RT-PCR证实GM-CSF基因表达盒已正确插入重组病毒的tk基因位置,并具有转录活性.亲本株和重组株的空斑形态、空斑直径大小无明显差异;两者病毒滴度无明显变化,生长曲线相似;体外遗传稳定性良好.兔体实验表明在免疫早期重组毒株能产生较亲本株更高水平的IFNβ(P＜0.05).但中和抗体水平、攻毒后的临床症状及病毒排毒时间等各项指标检测表明,亲本株和重组毒株之间无明显差异.在免疫早期重组株刺激机体产生的IFN-β高于亲本株,具有一定的应用前景.
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