论文部分内容阅读
近年来,用微藻作制备生物柴油的势头越来越猛,美、英、日、新西兰、澳大利亚等国已纷纷斥巨资建企业。各国研发的重点是两方面:一是藻种,二是光反应器。本文主要报导在藻种方面的一些考虑和初步结果。国内外在促进油脂合成方面考虑较多的是两种酶:乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)。本文在ACC基因上已做了多年努力,有些进展,但不理想。这里报导在念珠藻中,PEPC基因的正反向表达对脂类合成的影响。先把PEPC基因从念珠藻7120中调出来。为此,先对PEPC酶及其基因的序列做了生物信息学的分析,找到了合适的保守序列。然后设计引物,合成引物,用PCR技术以念珠藻7120基因组为模板,克隆PEPC基因,然后构建正义和反义两种载体,把目的基因用三亲接合法转入念珠藻表达。用抗生素筛选后,测定基因表达的结果。结果表明,反义PEPC念珠藻中PEPC酶活性降低了87.1[%],脂类增加了54.7[%];正义PEPC念珠藻的PEPC酶活性增加了81.1[%],脂类减少了58.4[%]。这两种转基因念珠藻的光合活性都比野生藻的高。